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CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
貨號(hào) | BC2055 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | H2S含量檢測 |
硫化氫(H2S)含量檢測試劑盒說明書
微量法
貨號(hào):BC2055
規(guī)格:100T/96S
產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體 110mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體20mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體8mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體8mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
產(chǎn)品說明:
硫化氫(H2S)是一種新型氣態(tài)信號(hào)分子,存在于腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì),生理濃度的H2S對神經(jīng)系統(tǒng)海馬的長時(shí)程增強(qiáng)功能具有重要的調(diào)節(jié)作用,并對自發(fā)性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發(fā)揮著重要的病理生理效應(yīng)。
H2S與N, N-二甲基對苯二胺和硫酸鐵銨等反應(yīng)生成亞甲基藍(lán),亞甲基藍(lán)在665nm處有最大吸收峰,通過測定其吸光值可計(jì)算H2S含量。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞樣本:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液一體積(mL)=500-1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔7s,總時(shí)間3min),12000g 4℃離心10min;然后取0.8mL上清液,再加入0.15mL提取液二,12000g 4℃離心10min,取上清置于冰上待測。
2. 組織樣本:按照組織質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)為1:5-10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液一),進(jìn)行冰浴勻漿;12000g 4℃離心10min;然后取0.8mL上清液,再加入0.15mL提取液二,12000g 4℃離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 血清(漿)或其它液體樣本:取100μL血清(漿)或其它液體樣本加入1mL提取液一,12000g 4℃離心10min;然后取0.8mL上清液,再加入0.15mL提取液二,12000g 4℃離心10min,取上清置于冰上待測。
二、測定步驟
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至665nm,分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。
2. 加樣表(按順序在EP管或96孔板中加入下列試劑)
試劑名稱(μL) | 測定管 | 空白管 |
樣 本 | 50 | - |
蒸餾水 | - | 50 |
試劑一 | 75 | 75 |
試劑二 | 75 | 75 |
充分混勻,室溫靜置10min后,665nm處測定各管吸光值A,分別記為A測定、A空白,計(jì)算ΔA=A測定-A空白??瞻坠苤恍铚y1-2次。
三、H2S含量計(jì)算
1、用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(nmol/mL)為x軸,以其對應(yīng)的吸光值為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程y = 0.0026x-0.0268,R2 = 0.9973;將ΔA帶入公式中得到x(nmol/mL)。
(1)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
H2S含量(nmol/g 質(zhì)量)= x×(V上清+V提取液二)÷ (W×V上清÷V提取液一)=1.1875×x÷W
(2)按照樣本蛋白濃度計(jì)算
H2S含量(nmol/mg prot)= x×V樣÷(V樣×Cpr)= x÷Cpr
(3)按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
H2S含量(nmol/104 cell)= x×(V上清+V提取液二)÷ (cells×V上清÷V提取液一)=1.1875×x÷cells
(4)按照液體體積計(jì)算
H2S含量(nmol/mL)= x×(V上清+V提取液二)÷ [V液體×V上清÷(V提取液一+V液體)]=13.0625×x
V上清:提取時(shí)上清液的體積:0.8mL;V提取液一:加入提取液一的體積:1mL;V提取液二:加入提取液二的體積:0.15mL;V樣本:反應(yīng)液中加入樣本的體積,0.05mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;cells:細(xì)胞數(shù)量,104個(gè);V液體:液體樣本體積:0.1mL。
2、用96孔板測定的計(jì)算公式如下
以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(nmol/mL)為x軸,以其對應(yīng)的吸光值為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程y = 0.0020x-0.0633,R2 = 0.9951;將ΔA帶入公式中得到x(nmol/mL)。
(1)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
H2S含量(nmol/g 質(zhì)量)= x×(V上清+V提取液二)÷ (W×V上清÷V提取液一)=1.1875×x÷W
(2)按照樣本蛋白濃度計(jì)算
H2S含量(nmol/mg prot)= x×V樣÷(V樣×Cpr)= x÷Cpr
(5)按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
H2S含量(nmol/104 cell)= x×(V上清+V提取液二)÷ (cells×V上清÷V提取液一)=1.1875×x÷cells
(6)按照液體體積計(jì)算
H2S含量(nmol/mL)= x×(V上清+V提取液二)÷ [V液體×V上清÷(V提取液一+V液體)]=13.0625×x
V上清:提取時(shí)上清液的體積:0.8mL;V提取液一:加入提取液一的體積:1mL;V提取液二:加入提取液二的體積:0.15mL;V樣本:反應(yīng)液中加入樣本的體積,0.05mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;cells:細(xì)胞數(shù)量,104個(gè);V液體:液體樣本體積:0.1mL。
注意事項(xiàng):
1、如果ΔA值過低或接近空白值,建議增加樣本量后再進(jìn)行測定;如果ΔA>1.2,建議稀釋樣本后再進(jìn)行測定,計(jì)算公式中要乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
1、 稱取0.1g小鼠肝臟按照樣本提取步驟處理,按照測定步驟操作,使用96孔板測定665nm處反應(yīng)液吸光度,計(jì)算ΔA = A測定-A空白=0.150-0.121=0.029,將ΔA代入標(biāo)準(zhǔn)方程y = 0.0020x-0.0633,R2 = 0.9951,計(jì)算得x;按樣本質(zhì)量計(jì)算得:
H2S含量(nmol/g 質(zhì)量)= x×(V上清+V提取液二)÷ (W×V上清÷V提取液一)=548.03nmol/g 質(zhì)量。
2、 稱取0.1g紫葉李按照樣本提取步驟處理,按照測定步驟操作,使用96孔板測定665nm處反應(yīng)液吸光度,計(jì)算ΔA = A測定-A空白=0.270-0.121=0.149,將ΔA代入標(biāo)準(zhǔn)方程y = 0.0020x-0.0633,R2 = 0.9951,計(jì)算得x;按樣本質(zhì)量計(jì)算得:
H2S含量(nmol/g 質(zhì)量)= x×(V上清+V提取液二)÷ (W×V上清÷V提取液一)=1260.53nmol/g 質(zhì)量。
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H2S含量檢測試劑盒 微量法 H2S含量檢測試劑盒 微量法
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