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總*固醇(TC)含量檢測試劑盒 脂肪酸

總*固醇（TC）含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC1980
規(guī)格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 提取液：自備異丙醇，大約需要60mL，常溫保存；試劑盒內提供一個30mL棕色空瓶，僅做分裝使用，請自行標注試劑名稱。

2. 標準品：10 mg膽*醇，臨用前加入517 μL提取液，振蕩溶解，即為50 μmol/mL的膽*醇標準品，2-8℃可保存4周。

3. 試劑三：液體置于試劑瓶內EP管中，使用前用掌上離心機將液體甩離至底部。

4. 工作液的配制：根據樣本量將試劑一：試劑二：試劑三按9mL：60μL：9μL（約10T）的比例配制工作液，現用現配。

產品說明：
總*固醇（Total Cholesterol，TC）是指所有脂蛋白所含膽*醇的總和，包括游離膽*醇和膽*醇酯。
利用酯酶催化膽*醇酯水解生成游離膽*醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把膽*醇酯轉化為FC；進一步利用膽*醇氧化酶催化FC氧化，生成4-膽甾烯酮和H₂O₂；最后利用過氧化物酶催化 H₂O₂氧化4-氨基安*比林和酚，生成紅色醌類化合物，其在500nm有特征吸收峰，其顏色深淺與TC含量成正比。

技術指標：
低檢出限：0.01 μmol/mL
線性范圍：0.019-1.25 μmol/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、天平、低溫臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、可調式移液槍、EP管、冰、蒸餾水、異丙醇（AR，98%）。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：

1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者用提取液稀釋樣本（血清（漿）用蒸餾水稀釋）后再進行測定。注意同步修改計算公式。

2. 提取液中含有使蛋白變性的成分，故按蛋白濃度計算時需要重新提取蛋白進行測定。

實驗實例：

1. 取0.1054g大鼠腎臟加入1mL提取液進行冰浴勻漿，按照測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A空白=0.595-0.053=0.542，根據標準曲線y=0.7703x-0.0021，R²=0.9985，計算x=0.706，按樣本質量計算含量得：

TC含量（μmol/g 質量）=x÷W×F =6.698 μmol/g 質量。

1. 取5×10⁶個BNL細胞加入1mL提取液進行超聲破碎，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A空白=0.141-0.053=0.088，根據標準曲線y=0.7703x-0.0021，R²=0.9985，計算x=0.117，按細胞數量計算含量得：

TC含量（μmol/10⁶ cell）= x÷N×F =0.0234 μmol/10⁶ cell。

1. 取人血清樣本，直接按照測定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A空白=0.404-0.041=0.363，根據標準曲線y=0.7703x-0.0021，R²=0.9985，計算x=0.474，按血清（漿）等液體體積計算含量得：

TC含量（μmol/dL）=x×100×F =47.4 μmol/dL
相關發(fā)表文獻：

1. Qin Yuan,Shang Lin,Yuan Fu,et al. Effects of extraction methods on the physicochemical characteristics and biological activities of polysaccharides from okra (Abelmoschus esculentus). International Journal of Biological Macromolecules. April 2019; 127:178-186. (IF4.784)

2. Wei Hu, Rui Wei, LiYue Wang,et al. Correlations of MMP-1, MMP-3, and MMP-12 with the degree of atherosclerosis, plaque stability and cardiovascular and cerebrovascular events. EXPERIMENTAL AND THERAPEUTIC MEDICINE. 2018;(IF1.448)

3. Jieyong Xing,Yanshao Liu,Tao Chen,et al. Correlations of chemokine CXCL16 and TNF-α with coronary atherosclerotic heart disease. Experimental and Therapeutic Medicine. November 2017;(IF1.448)

4. Jiabin Huang,Shangjun Chen,Dongliang,et al. Long noncoding RNA lncARSR promotes hepatic cholesterol biosynthesis via modulating Akt/SREBP-2/HMGCR pathway. Life Sciences. June 2018;(IF3.448)

5. Li W, Li Y, Zhao Y, et al. The protective effects of aloperine against ox-LDL-induced endothelial dysfunction and inflammation in HUVECs[J]. Artificial Cells, Nanomedicine, and Biotechnology, 2020, 48(1): 107-115.

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