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更新時(shí)間:2024-08-01 10:06:39瀏覽次數(shù):881評(píng)價(jià)
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質(zhì)粒大量提取試劑盒 價(jià)格是多少
貨號(hào):D1110
規(guī)格:10T
保存:常溫保存,復(fù)檢期一年。
產(chǎn)品說(shuō)明:
本試劑盒采用堿裂解法裂解細(xì)胞,通過(guò)吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的特性提取質(zhì)粒DNA。吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA,可大限度去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。從50-100ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中,可快速提取200-300μg純凈地高拷貝質(zhì)粒DNA,提取率達(dá)85-90%。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)的分子生物學(xué)試驗(yàn),包括酶切、PCR、測(cè)序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn)。本試劑盒無(wú)需使用酚等有毒試劑,操作安全。
使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇,加入體積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。溶液Ⅰ在使用
前先加入 RNaseA(將試劑盒中提供的 RNaseA 全部加入),混勻,置于 2-8℃保存。如非指明,所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)在室溫下離心。
操作步驟:
1. 收集 50-100ml 過(guò)一夜培養(yǎng)的菌液 11000rpm 離心 10 分鐘,盡量吸除上清(菌液較多時(shí)可以通過(guò)多次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中)。
2. 向留有菌體沉淀的離心管中加入 5ml 溶液Ⅰ (請(qǐng)先檢查是否已加入 RNaseA) ,使用移液器或渦旋振蕩器*懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。注意:如果菌塊未*混勻,會(huì)影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。
3. 向離心管中加入 5ml 溶液Ⅱ ,溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次使菌體充分裂解。 注意:①翻轉(zhuǎn)一定要溫和,以免污染細(xì)菌基因組 DNA。②作用時(shí)間不要超過(guò) 5 分鐘,以免質(zhì)粒受到破壞。
4. 向離心管中加入 7ml 溶液Ⅲ ,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次,充分混勻,此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀(如菌液過(guò)多,可在此步放置 5 分鐘,以盡可能的降解 RNA)。11000rpm 離心 10 分鐘,用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個(gè)干凈的離心管中,注意盡量不要吸出沉淀。
注意:溶液Ⅲ加入后應(yīng)立即混勻,避免產(chǎn)生局部沉淀。 如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。
5. 將上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱放入收集管中),室溫放置 2-3 分鐘,11000rpm 離心 30-60 秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中(如為提高得率,可將收集管中的液體加入吸附柱再次吸附一次)。
6. 向吸附柱中加入 8ml 漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇),11000rpm 離心 2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
7. 向吸附柱中加入 6ml 漂洗液,11000rpm 離心 2min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。
8. 11000rpm 離心 5min,將吸附柱敞口置于室溫或 50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會(huì)影晌后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR 等。
9. 將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加 1-2ml 經(jīng) 65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置 5min,11000rpm 離心 2min,收集質(zhì)粒溶液用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
10. 為了增加質(zhì)粒的回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,室溫放置 5min, 11000rpm 離心 2min。
產(chǎn)品包裝:
注意事項(xiàng):
1、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA全部加入),混勻,置于2-8℃保存。
2、*次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在漂洗液中加入無(wú)水乙醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無(wú)水乙醇)。
3、使用前請(qǐng)先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象可在37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復(fù)澄清后再使用。
4、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子,如非指明,所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)室溫下進(jìn)行離心。
5、如果是提取革蘭氏陽(yáng)性菌質(zhì)粒,必須在裂解細(xì)胞前破細(xì)胞壁,方法如下:收集適量菌體,加入5ml溶液Ⅰ,充分懸浮菌體,加入溶菌酶終濃度為10-20mg/ml,37℃處理30min左右。加入溶菌酶的濃度和處理時(shí)間可根據(jù)不同的菌株和具體試驗(yàn)條件進(jìn)行調(diào)整。
6、洗脫緩沖液的體積好不少于1ml,體積過(guò)小會(huì)影響回收效率;洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響,若需要用水做洗脫液
應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍),pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率。
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質(zhì)粒大量提取試劑盒 價(jià)格是多少訂購(gòu)說(shuō)明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整,部分城市可到17點(diǎn)整,因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
運(yùn)輸說(shuō)明:
1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái),再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái),再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨,準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。
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