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超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC0175
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：使用前先使用掌上離心機(jī)離心至管底再吹打混勻；

2. 試劑二工作液：根據(jù)樣本數(shù)量按試劑二：蒸餾水=30μL：270μL（共300μL，約15S）的比例配制試劑二工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配；

3. 試劑四工作液：根據(jù)樣本量按試劑四：蒸餾水=60μL：240μL（共300μL，約30T）的比例配制試劑四工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明：
SOD（EC 1.15.1.1）是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶，是重要的氧自由基清除劑，能催化超氧化物陰離子發(fā)生歧化作用，生成H₂O₂和O₂。SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是H₂O₂主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。
通過黃*呤及黃*呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O₂^-)，O₂^-可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜，后者在560nm處有吸收；SOD可清除O₂^-，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液藍(lán)色越深，說明SOD活性愈低，反之活性越高。血清或者SOD酶活小的樣本更適合使用BC5165超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測試劑盒（WST-1法）進(jìn)行測定。


注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：

1. 樣本和試劑二工作液使用時在冰上放置。

2. 樣本較多時，可按表格配制測定管工作液和對照管工作液（包含試劑一、（試劑二工作液）、試劑三、蒸餾水），試劑四工作液必須最后加入。

3. 反應(yīng)完成后，可能有沉淀生成，混勻后測定即可。

實驗實例：

1. 取0.1g大鼠腎臟加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定= A測定-A對照=0.566-0.138=0.428，ΔA空白=A1空白-A2空白=0.802-0.041=0.761，抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白×100%=43.8%，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

SOD活性（U/g 質(zhì)量）=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W=77.94 U/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g稗草葉片加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清用蒸餾水稀釋4倍后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定= A測定-A對照=0.498-0.078=0.42，ΔA空白=A1空白-A2空白=0.771-0.042=0.729，抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白×100%=42.4%，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

SOD活性（U/g 質(zhì)量）=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×4（稀釋倍數(shù)）=294.4U/g 質(zhì)量。

1. 取20μL羊血清蒸餾水稀釋50倍后直接按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定= A測定-A對照=0.467-0.049=0.418，ΔA空白=A1空白-A2空白=0.771-0.042=0.729，抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白×100%=42.7%，按血清/血漿體積計算酶活得：

血清（漿）SOD活性（U/mL）=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ×50（稀釋倍數(shù)）=372.6 U/mL。

1. 取1000萬細(xì)胞加入1mL提取液，超聲破碎，離心取上清，直接按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定= A測定-A對照=0.52-0.058=0.462，ΔA空白=A1空白-A2空白=0.802-0.04=0.762，抑制百分率=(ΔA空白-ΔA測定) ÷ΔA空白×100%=39.4%，按細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計算酶活得：

SOD 活力（U/10⁴ cell）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反總] ÷(1000×V樣÷V樣總)=0.0065 U/10⁴ cell。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Beibei Li,Yang Ding,Xiuli Tang, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus). Food and Bioprocess Technology. April 2019;12: 563-574. (IF3.032)

2. Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng, et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019; 162: 364-373. (IF3.712)

3. Yang Yang,Li Jing,Wei Cong, et al. Amelioration of nonalcoholic fatty liver disease by swertiamarin in fructose-fed mice. Phytomedicine. June 2019;59. (IF4.18)

1. Siyang Yu,Bo Dong,Zhenfei Fang,et al.Knockdown of lncRNA AK139328 alleviates myocardial ischaemia/reperfusion injury in diabetic mice via modulating miR-204-3p and inhibiting autophagy. Journal of Cellular and Molecular Medicine. July 2018;(IF4.658)

2. Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, et al. Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development. Toxicological & Environmental Chemistry. February 2019;(IF3.547)

參考文獻(xiàn)：

1. Spitz D R, Oberley L W. An assay for superoxide dismutase activity in mammalian tissue homogenates[J]. Analytical Biochemistry, 1989, 179(1):8-18.

2. Masayasu M, Hiroshi Y. A simplified assay method of superoxide dismutase activity for clinical use[J]. Clinica Chimica Acta, 1979, 92(3):337-342.

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