此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此，可通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免疫反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過(guò)酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定，這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái)，使ELISA(酶聯(lián)免疫試劑盒)方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。

酶聯(lián)免疫試劑盒在操作過(guò)程的影響因素如下：

1、酶聯(lián)免疫試劑盒操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度(保持在18C～25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，是否符合要求。

2、酶聯(lián)免疫試劑盒要保證加液量一致我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺(jué)滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn)，造成顯色不統(tǒng)一，判斷錯(cuò)誤。

3、正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺，血清殘留在反應(yīng)孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說(shuō)明書一致，否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。

4、酶聯(lián)免疫試劑盒顯色液量不可過(guò)多加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng)，顯色液量不能過(guò)多，以免顯色過(guò)強(qiáng)。

5、手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大，洗滌次數(shù)不要超過(guò)說(shuō)明書推薦的洗滌次數(shù)，洗液在反應(yīng)孑L內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長(zhǎng)。不要使洗液在孑L間竄流，造成孔問(wèn)污染，導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性。

酶聯(lián)免疫試劑盒的使用注意事項(xiàng)具體如下：

1. 酶聯(lián)免疫試劑盒在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí)，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。

2. 濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。

3. 一次加樣時(shí)間最好控制在分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。

5. 酶聯(lián)免疫試劑盒的洗滌過(guò)程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。

6. 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以稀釋倍數(shù)。

7. 剛開(kāi)啟酶聯(lián)免疫試劑盒的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。

8. 酶聯(lián)免疫試劑盒保存：未開(kāi)封的試劑盒應(yīng)儲(chǔ)存于2-8℃;開(kāi)封后的酶標(biāo)板應(yīng)與干燥劑一起儲(chǔ)存于鋁箔袋中置于2-8℃保存。僅在此出儲(chǔ)存條件下，產(chǎn)品在有效期內(nèi)可正常使用。