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堿性磷酸酶研究應(yīng)用
最近更新時間：2011-9-16
提 供 商：上海研生實(shí)業(yè)有限公司資料大小：8B
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堿性磷酸酶也是目前免疫診斷試劑產(chǎn)品zui常用的標(biāo)記酶之一。與辣根過氧化物酶（HRP）相比，ALP用作標(biāo)記酶的優(yōu)點(diǎn)是，穩(wěn)定性高、靈敏度高，缺點(diǎn)是成本高，標(biāo)記困難。
在研究中zui常用的ALP如下：
◇細(xì)菌堿性磷酸酶Bacterial alkaline phosphatase （BAP）, 來源：Escherichia coli C4 ；
◇ Shrimp alkaline phosphatase （SAP）, 來源：一種北極蝦 （Pandalus borealis） ;
◇ 小牛腸堿性磷酸酶Calf Intestinal Alkaline Phosphatase （CIP）;
◇ 胎盤堿性磷酸酶Placental alkaline phosphatase （PALP）和分泌性堿性磷酸酶the secreted alkaline phosphatase （SEAP），后者是前者的C末端短缺版——與PALP相比，SEAP沒有PALP的C末端zui后24個氨基酸（這24個氨基酸構(gòu)成了與糖基化磷脂酰肌醇靶向錨定的區(qū)域）
ALP主要應(yīng)用于分子生物學(xué)和酶免分析中：
★分子生物學(xué)中主要用作核酸的去磷酸化。因為DNA通常會在5'端結(jié)合磷酸基團(tuán)，用ALP去磷酸化能防止DNA分子5'端與3'端連接，從而在后續(xù)步驟準(zhǔn)備好之前讓DNA分子抑制處于線性化狀態(tài);同樣，通過去磷酸化可用作放射標(biāo)記示蹤。通常用作這些目的用的zui多的是Shrimp alkaline phosphatase （SAP），因為在反應(yīng)完成之后它是zui容易滅活的。
★酶免分析中應(yīng)用zui多的是ELISA，以競爭法測小分子抗原為例，抗體先與固相載體結(jié)合，然后讓待測樣品與事先經(jīng)ALP標(biāo)記過的該抗原競爭地與抗體結(jié)合，洗去未反應(yīng)的過量ALP-抗原，加入顯色底物。則可以通過與按梯度濃度變化的標(biāo)準(zhǔn)品繪出的標(biāo)準(zhǔn)曲線對比從而知道待測樣品中抗原的濃度。ELISA中用的比較多的是 辣根過氧化物酶（HRP），底物為OPD， 深桔黃色 ，檢測波長492nm；TMB， 藍(lán)綠色，檢測波長450nm 堿性磷酸酶，底物為PNPP（對－消基苯磷酸酯）， 黃色 ，檢測波長405nm
★目前工業(yè)上一個普遍的應(yīng)用是作為檢驗牛奶的巴斯的滅菌的標(biāo)志：被巴斯德過高溫滅菌的分子會被滅活，向其中和未巴斯滅菌的牛奶中加入ALP的底物，2分鐘后未滅菌的樣品應(yīng)該顯黃色，如果待測樣品（指被巴斯滅菌過的牛奶）也能呈現(xiàn)相同顏色，則說明巴斯滅菌溫度未過度。當(dāng)然總有例外，因為有少數(shù)細(xì)菌會產(chǎn)生耐熱的ALP。