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凱氏法測定非蛋白質(zhì)氮的測定知識
最近更新時(shí)間：2012-1-12
提 供 商：上海研生實(shí)業(yè)有限公司資料大小：8.5KB
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用凱氏法測定蛋白質(zhì)的含氮量相當(dāng)恒定（約14%一18%），平均含量約為16%。因此，蛋白質(zhì)氮乘以6.25%即為蛋白質(zhì)含量。
如果實(shí)驗(yàn)需要時(shí)，也可以用以下方法直接測定。
測定的流程是，稱取0.2-0.5g風(fēng)干的植物材料，放入100ml燒杯中，加入50ml水，煮沸5min，在40-50℃下保溫30min。徐徐加入10ml6%硫酸銅，搖勻，靜置lh（或過夜）。過濾，殘?jiān)磩P氏定氮法將殘?jiān)?，蒸餾，測定收集液中氨，計(jì)算得出含氮量。非蛋白質(zhì)氮包括溶于水的氮化物，如氨基酸、酸性氮和有機(jī)含氮堿等。
其總量可以按總氮減去蛋白質(zhì)氮計(jì)算得出，也可以按下法測定，即：稱取0.2-0.5g植物樣品，放入研缽中加2ml水，研磨成勻漿態(tài)。加入3ml3%硫酸銅溶液，搖勻，勻漿轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，同時(shí)以8ml水沖洗凈殘?jiān)?/p>
離心管放入沸水中，用玻璃棒攪拌3min。取出加入3ml0.2mol/L的NaOH，攪勻，靜放10min，離心。將溶液放入100ml凱氏瓶中，用熱水沖洗沉淀2次，每次用10ml，每次沖洗時(shí)要向沖洗的水中加人l滴3%的硫酸銅溶液。
然后向凱氏瓶的浸出物中加入2ml濃硫酸，O.3m110%鉬酸鈉（10gNa2MoO4·2H2O溶解于100m1水中，加入0.5ml2mol/LNaOH，加熱至沸，并煮沸15min，冷卻后補(bǔ)充無氨水100ml），4滴3%過氧化氫。放在電爐上蒸發(fā)，直至出現(xiàn)泡沫，然后降低溫度以免泡沫濺到瓶頸上。繼續(xù)用微火加熱直至硫酸出現(xiàn)白色蒸汽。
之后用球形玻璃塞塞上凱氏瓶口，增強(qiáng)火力，消化到溶液透明為止。冷卻后向瓶中殘留物加入10ml水。溶液轉(zhuǎn)人50ml容量瓶中，用水沖洗殘?jiān)?，并補(bǔ)加水到50ml，混勻。取25ml溶液放人燒杯中滴定。加1滴0.1%甲基橙溶液，冷卻后，以2mol/LNaOH溶液滴定，直到指示劑呈現(xiàn)黃色為止，不能滴定過頭。然后加10ml含有溴酸鉀的pH6.7的磷酸緩沖液和5ml0.12mol/L氯氨溶液（15g氯氨溶于水中，用水稀釋到1L，混勻，用棉花過濾后，裝入暗色瓶中），即用玻璃蓋蓋住燒杯，以圓周運(yùn)動(dòng)方式將溶液混勻，并靜置25min，其后加入2ml2%碘酸鉀溶液，10m18%草酸溶液。
在有淀粉指示劑存在下，用0.02mol/L硫代硫酸鈉溶液滴定釋放出來的的碘。1ml0.02mol二硫代硫酸鈉相當(dāng)于0.09338mg氮。另按此法設(shè)不加樣品的對照，操作步驟*與上相同。
zui后按下面公式計(jì)算樣品中的非蛋白氮含量。
X（非蛋白氮含量%）=[0.4667×50×K×（6z-6）1/（25×7n） =[0.9338×K×（a-b）]/72
式中：
50為試液體積（ml）;
25為用氯氨法測定時(shí)所取試液的體積（ml）;
a為滴定對照所用去的0.02mol二硫代硫酸鈉體積（ml）;
b為滴定試液所用去的0.02mol/L硫代硫酸鈉體積（ml）;
K為硫代硫酸鈉溶液的滴定度372為分析的樣品重。