測量細胞電阻和電壓
一. 物品準備(在超凈臺中準備如下物品)
1.
*充好電的Millicell ERS-2系統(tǒng)
2.
STX04測試電極
3.
STX01或者STX03電極 (用于檢測Millicell 6, 12和24孔板), STX00電極(用
于檢測Millicell 96孔板),如果要測量電壓則要*行電極平衡
4.
未培養(yǎng)細胞的Millicell培養(yǎng)皿(對照)
5.
培養(yǎng)了細胞的Millicell培養(yǎng)皿
6.
70%的乙醇
7.
3/32”平頭螺絲刀
二. 電極滅菌
電極是非無菌的,我們建議使用乙醇滅菌,也可以用環(huán)氧乙烷、紫外線或者
殺菌劑滅菌。不能使用高溫或者火焰滅菌,因為電極無法承受高溫。乙醇滅
菌流程如下:
1.
將電極插入70%乙醇浸泡15min進行滅菌,取出電極風干15秒;注意:
不能將電極浸入乙醇中超過30min,這會損壞電極的保護層,縮短其使
用壽命。
2.
用與培養(yǎng)基相似的電極液(或者0.1-0.15M NaCl/KCl)沖洗電極;
3.
若是進行電阻測量,此時電極已可以使用;
4.
若是進行電壓測量,將電極在與培養(yǎng)基相似的無菌電極緩沖液中平衡15
分鐘。注意:為了保持無菌,可以將電極放在紫外燈下短時間照射。
三. 電阻測量(量程:0-9999Ω,靈敏度:1Ω)
注意:雖然儀表量程能夠達到13,000Ω,但是10,000Ω及以下的讀數(shù)才具準確
性。
1.
將細胞置于室溫下平衡30分鐘;
2.
如前所述,測試Millicell ERS-2系統(tǒng);
3.
確保儀表與充電器斷開;
4.
將模式打到Ohms,開關(guān)打到ON;
5.
將電極短端浸入培養(yǎng)板內(nèi)部,長端浸入外部。
短端不要碰到小室膜上生長的細胞,長端需碰到外
側(cè)孔的底部。為了實驗結(jié)果的穩(wěn)定和可重復性,
確保電極平穩(wěn),并與培養(yǎng)板成90°;
6.
記錄電阻值。