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PCR儀的種類】
分類總是五花八門,總體來說可以分為PCR擴(kuò)增儀和實(shí)時(shí)熒光PCR儀兩大類,有人也把它們稱為半自動(dòng)和全自動(dòng),或者定性和定量,都是比較不準(zhǔn)確的稱呼。
PCR最重要的就是個(gè)升降溫過程,最初的水浴鍋式PCR,就是三個(gè)水浴箱,一個(gè)機(jī)械臂,定時(shí)抓出反應(yīng)槽轉(zhuǎn)換水浴鍋。這種東東體積大,迅速慢,但其實(shí)結(jié)果并不比以后的PCR儀差,我現(xiàn)在都很欣賞。后來有人利用致冷和加熱做成了,固定位置升降溫的PCR擴(kuò)增儀。
后來隨著定量技術(shù)的發(fā)展,有公司將擴(kuò)增儀和檢測(cè)做成一體,也就成了現(xiàn)在所謂的全自動(dòng)(或定量)PCR儀。當(dāng)然標(biāo)準(zhǔn)的叫實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。
【品牌】
什么東西都有品牌,現(xiàn)在國(guó)內(nèi)國(guó)外PCR儀的品牌很多,就國(guó)外而言比較著名的有:
ABI美國(guó)應(yīng)用生物公司:老牌的生物公司貴族,其收購了原來的PE,而PE公司是PCR的*,旗下有很多經(jīng)典的PCR儀,有5700(已停產(chǎn))、7700(已停產(chǎn))、7000、7900等實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。
ROCHE羅氏診斷:炙手可熱的新貴,LIGHTCYCLER是其的PCR儀,市場(chǎng)做得很不錯(cuò),以科研定位為主,但在國(guó)內(nèi)很多醫(yī)院使用,其很特色離心、氣加熱、毛細(xì)管等,設(shè)計(jì)另類,是最有特色的PCR儀,當(dāng)然好壞另議,就單其另辟蹊徑的技術(shù)能力和膽識(shí)就值的佩服。
MJ:剛?cè)胫袊?guó)的名流,MJ的擴(kuò)增儀在生命科研領(lǐng)域比較出名,其產(chǎn)品比較適合高通量檢測(cè),人類基因組計(jì)劃用得很多。其實(shí)時(shí)熒光PCR儀剛進(jìn)入中國(guó)不久,孔間能使用不同溫度是其特色。這點(diǎn)其實(shí)比較有用。
伯樂:呵,廉價(jià)的麥當(dāng)勞,ICYCLER是其主打,進(jìn)入中國(guó)已經(jīng)比較久了,產(chǎn)品和5700一樣,是擴(kuò)增儀上加裝定量模塊而成,特點(diǎn)是價(jià)格較低。
國(guó)內(nèi)現(xiàn)在做的也很多,比如杭州博日、杭州朗基、上海楓嶺、廈門安普利等。
【選購】
準(zhǔn)確的講包括實(shí)時(shí)熒光定量在內(nèi)都沒有自動(dòng)加樣和標(biāo)本處理系統(tǒng),只能算半自動(dòng)的。PCR儀是個(gè)簡(jiǎn)單的東東,一個(gè)溫控設(shè)備和一個(gè)檢測(cè)設(shè)備而已。
關(guān)于溫控,主要是介質(zhì)問題。理想的介質(zhì)是導(dǎo)熱性好、比熱大、接觸緊密的東東。
這方面好的是水浴和油浴,比熱大(油比水更大)、溶劑化物體,與反應(yīng)物無縫接觸,效果當(dāng)然最好。但是自動(dòng)化,小型化難,只有最初的水浴鍋式使用。
硅加熱,這是使用普遍的一種,優(yōu)點(diǎn):易自動(dòng)化、速度快、直接加熱降溫,效果當(dāng)然好,但是第一成本較高,第二其使用的介質(zhì)是金屬,導(dǎo)熱雖然好,但是與反應(yīng)管,很難做到無縫接觸,定性時(shí)代可以加油,但用熒光定最,由于油有熒光信號(hào)不能用。所以在無縫接觸上差一些。第三由于是底部加熱,下部壓力較大,有溢出的可能,不過新的儀器在加熱蓋以后解決了這個(gè)問題。
空氣加熱,用空氣做介質(zhì)有優(yōu)點(diǎn),與反應(yīng)體系無縫接觸,但是空氣的導(dǎo)熱性差、比熱小的弱點(diǎn)明顯。因此空氣加熱的要利用離心來產(chǎn)生空氣流動(dòng),增強(qiáng)導(dǎo)熱性,同時(shí)使用毛細(xì)管,加大接觸面積、試劑微量化來彌補(bǔ)。這樣做了以后效果還是不錯(cuò)。但有的廠商把什么離心、毛細(xì)管的好處大講特講,對(duì)氣加熱的弱點(diǎn)閉口不談,卻是高明的市場(chǎng)手法。同時(shí),使用離心,對(duì)標(biāo)本量增大是有影響的并且標(biāo)本量越大,空氣比熱小的弱點(diǎn)就越明顯,所以空所加熱的儀器標(biāo)本量都比較小。使用毛細(xì)管后由于反應(yīng)液與管的接觸面積增大,吸附現(xiàn)象更大,因此試劑的通用性差一般要專門開發(fā),成本高,雖然試劑用量少,但因?yàn)槭菍S迷噭?,每人份就是以?shí)際量算,并不省試劑。反而增加了毛細(xì)管成本。
關(guān)于功能,所有的PCR儀功能都大體相同。只有MJ孔間能使用不同溫度比較有特點(diǎn),這對(duì)于多項(xiàng)目同時(shí)檢測(cè)以及循環(huán)參數(shù)的調(diào)整比較有用。但其實(shí)時(shí)熒光的儀器剛進(jìn)入中國(guó)不久,具體如何還不得而知。
關(guān)于選購,根據(jù)單位情況而定,由于PCR的技術(shù)含量其實(shí)并不高,好的國(guó)產(chǎn)儀器如杭州博日(與日本著名廠商大和有關(guān))也差不太多。關(guān)于進(jìn)口儀器,羅氏的儀器不錯(cuò),但如果標(biāo)本量大,建議不要用羅氏。一則會(huì)累死的。另外,每個(gè)標(biāo)本要分?jǐn)偟臉?biāo)準(zhǔn)曲線、對(duì)照成本太高。同時(shí),試劑也比較受限。
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