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產(chǎn)品分類品牌分類

分子生化產(chǎn)品: 核酸純化 PCR及RT-PCR相關(guān)產(chǎn)品基因組DNA提取 DNA分子量克隆載體及相關(guān)產(chǎn)品感受態(tài)細(xì)胞蛋白質(zhì)研究相關(guān)產(chǎn)品電泳相關(guān)產(chǎn)品 OMEGA質(zhì)粒提取

生化試劑產(chǎn)品

細(xì)胞生物學(xué)產(chǎn)品: 細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子重組或天然蛋白

試劑盒產(chǎn)品: 人的ELISA試劑盒

抗體: 二抗一抗

儀器耗材

培養(yǎng)產(chǎn)品: 培養(yǎng)基

細(xì)胞庫(kù): 耐藥細(xì)胞株人細(xì)胞株標(biāo)記細(xì)胞株各類原代細(xì)胞

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Omega Bio-Tek
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Abcam
上海淳麥
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Sigma-Aldrich
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供應(yīng)簡(jiǎn)介詳細(xì)介紹

試劑盒組成	K5000	K5001	儲(chǔ)存溫度
1NFolin-Ciocalteu Reagent Solution CTC Solution SoSDS BSAStandard （0.5mg/ml）	20ml 40ml 40ml 4X 1 ml	50ml 2X 50ml 2X 50ml 4X 1ml	4度室溫室溫室溫或-20度

注意：

1.溫度過(guò)低時(shí)，溶液中如果有鹽析，需要保溫使其溶解后使用。

2.BSA使用前，需要用水稀釋到濃度為0.05mg/ml。

原理：

蛋白質(zhì)中的酪氨酸殘基與Folin-Ciocalteu酚試劑反應(yīng)形成的有顏色的復(fù)合物，比較與已知蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)BSA形成的顏色從而確定未知蛋白質(zhì)的含量。

注意：

1.該方法檢測(cè)的蛋白質(zhì)濃度范圍1ug-50ug/ml。

2.Folin-Ciocalteu酚試劑的穩(wěn)定期至少1年，CTC Solution穩(wěn)定期為六個(gè)月。使用前根據(jù)需要的量取等體積的Solution CTC和Solution SoSDS混勻后，得到CTC Working Solution.混合后的必須在24小時(shí)內(nèi)用完。。

3.由于Lowry法測(cè)定的是蛋白質(zhì)中酪氨酸殘基，對(duì)于那些酪氨酸殘基數(shù)高于或低于BSA,其測(cè)定的蛋白質(zhì)含量將偏低或偏高。如果遇到該情況，需要采用BCA或Bradford法測(cè)定。

4.閱讀測(cè)定方法后化學(xué)試劑對(duì)測(cè)定方法的影響。

測(cè)定方法（試管法）：

1.BSA標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的準(zhǔn)備：樣品用水或其他不干擾顯色反應(yīng)的緩沖配置，使待測(cè)定的濃度位于標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性部分。每個(gè)反應(yīng)準(zhǔn)備3個(gè)平行測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線一般5-6個(gè)點(diǎn)即可，根據(jù)樣品的濃度確定各點(diǎn)的具體濃度。稀釋BSA時(shí),可以用水，采用與樣品*或近似的溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)BSA使用前，需要用水稀釋到濃度為0.05mg/ml。可以在1.5ml Eppendorf管內(nèi)做反應(yīng)。在管壁上依次標(biāo)上序列號(hào)，按下表所列在管內(nèi)加BSA標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。注意：每次反應(yīng)都需要做一個(gè)和未知樣品溶液相同的空白對(duì)照。樣品如果濃度高于50ug/ml,需要用水或合適的緩沖稀釋，記錄稀釋的倍數(shù)。

	1	2	3	4	5	6	待測(cè)樣品稀釋1	待測(cè)樣品稀釋2
BSA （μl）（50ug/ml）	0	25	50	100	150	200	200	200
H₂O （μl）	200	175	150	100	50	0	0	0
CTC Working Solution, （μl）	200	200	200	200	200	200	200	200
	蓋上蓋子，室溫反應(yīng)10分鐘
1NFolin-Ciocalteu Reagent （μl）	100	100	100	100	100	100	100	100
	蓋上蓋子，室溫反應(yīng)30分鐘
OD₇₅₀


OD₇₅₀平均值
Con （μg/ml）	0	6.25	12.5	25	37.5	50

未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)

3.用容量為0.5ml、光徑為1cm的比色杯測(cè)定750nm的光吸收。注意：染料如果吸附到比色杯壁上，杯子可以用甲醇清洗。測(cè)定時(shí)，測(cè)定濃度由低到高，測(cè)定未知樣品時(shí)需要將杯子清洗干凈，空白先測(cè)定，然后樣品。

4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。注意：數(shù)據(jù)處理時(shí)需要去除明顯錯(cuò)誤的值。未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得。如果是計(jì)算機(jī)繪制得曲線，可以從計(jì)算機(jī)給出的線性方程式計(jì)算出未知樣品的濃度。

測(cè)定方法（96微孔板法）

1． BSA標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的準(zhǔn)備：樣品用水或其他不干擾顯色反應(yīng)的緩沖配置，使待測(cè)定的濃度位于標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性部分。每個(gè)反應(yīng)準(zhǔn)備3個(gè)平行測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線一般5-6個(gè)點(diǎn)即可，根據(jù)樣品的濃度確定各點(diǎn)的具體濃度。稀釋BSA時(shí),可以用水，采用與樣品*或近似的溶液。

2． 標(biāo)準(zhǔn)BSA使用前，需要用水稀釋到濃度為0.05mg/ml。按下表所列在孔內(nèi)加BSA標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。注意：每次反應(yīng)都需要做一個(gè)和未知樣品溶液相同的空白對(duì)照。樣品如果濃度高于50ug/ml,需要用水或合適的緩沖稀釋，記錄稀釋的倍數(shù)。

	1	2	3	4	5	6	待測(cè)樣品稀釋1	待測(cè)樣品稀釋2
BSA （μl）（50ug/ml）	0	5	10	20	30	40	40	40
H₂O （μl）	40	35	30	20	10	0	0	0
CTC Working Solution, （μl）	200	200	200	200	200	200	200	200
	蓋上96孔板蓋，室溫反應(yīng)10分鐘
1NFolin-Ciocalteu Reagent （μl）	20	20	20	20	20	20	20	20
	蓋上96孔板蓋，室溫反應(yīng)30分鐘
OD₇₅₀


OD₇₅₀平均值
Con （μg/ml）	0	6.25	12.5	25	37.5	50

未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。

3．用酶標(biāo)測(cè)試儀750nm測(cè)定光吸收。

4．標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。注意：數(shù)據(jù)處理時(shí)需要去除明顯錯(cuò)誤的值。未知樣品濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得, 實(shí)際濃度需要乘以樣品的稀釋倍數(shù)。如果是計(jì)算機(jī)繪制得曲線，可以從計(jì)算機(jī)給出的線性方程式計(jì)算出未知樣品的濃度。注意：實(shí)際操作時(shí)不必每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以做一兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品，和標(biāo)準(zhǔn)曲線比較得出濃度系數(shù)。未知樣品的實(shí)際濃度=從標(biāo)準(zhǔn)曲線中得到的濃度*濃度系數(shù)。

注意：

一、如果樣品中含有影響測(cè)定的物質(zhì)，按下法除去：

1．用水將樣品調(diào)到體積為200ml, 加入20ml 0.15%去氧膽酸鈉，混勻，室溫放置10分鐘。

2．加入20ml 72%的TCA,室溫放置5分鐘。

3． 3000X g離心15分鐘，小心去除上清，用200ml水溶解。此時(shí)的樣品可以用于測(cè)定。

二、常用化學(xué)試劑對(duì)Lowry法測(cè)定方法的影響

Glycin<100mM, HEPE<1mM, Imidazole<25mM, NaCl<1M, Tris<10mM, NaPi<100mM, CHAPS<0.05%, NP40<0.02%, SDS<1%, Trition X-100<0.03%, Tween<0.05%,EDTA<1mM, EGTA<1mM, Glucose<100mM, 2-Mercaptoethanol<1mM, Sodium Sitrate<100mM, Urea<3M, NaOH<100mM, PMSF<1mM, Sucrose<7%, Methanol<10%,DMSO<10%, Ethanol<10%, DMF<10%, Acetone<10%,Aprotinin<10mg.ml,.

NO DTT, No DTE and No Ammonium Sulfate （不能含DTE,DTT和硫酸胺）

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