7-AAD染色試劑盒
（Cell Apoptosis 7-AAD Detection Kit）
Cat number：KGA For Research Use Only
Store at4℃ for one year
Expire date：
一、試劑盒說明
7-AAD （7-amino-actinomycin D）是一種核酸染料，它不能通過正常質膜，隨著細胞凋亡、細胞死亡過程，質膜對7-AAD的通透性逐漸增加，結合細胞凋亡中DNA的有控降解，在合適波長激發(fā)光的激發(fā)下可發(fā)出明亮的紅色熒光，通過7-AAD標記DNA的強弱，將細胞分為三群：7-AAD強為死亡細胞，7-AAD弱是凋亡細胞，7-AAD-為正常活力細胞。7-AAD同PI 有著相似的熒光特性，但其發(fā)射波譜較PI窄，對其他檢測通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI 的*替代品，可與Annexin V-EGFP/FITC/PE聯(lián)合使用。
本試劑盒適用于培養(yǎng)的細胞染色，可應用于熒光顯微鏡、激光共聚焦計或流式細胞儀檢測。
二、試劑盒組份
| 組分 | KGA219（100 assays） | 儲存條件 |
| 7-AAD染液 | 0.5 mL | 4℃,避光 |
| 10×Assays Buffer | 5 mL | 4℃ |
1×Assays Buffer工作液配制：用前將10×Assays Buffer 用雙蒸水稀釋10倍。
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
流式細胞儀、激光共聚焦或熒光顯微鏡：激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm
微量移液器、1.5m L Microtube、載玻片
四、使用注意事項
1． 微量試劑取用前請離心集液。
2． 7-AAD避光保存及使用。
3． 7-AAD為潛在致癌物，操作時請采取防護措施，穿防護服、戴手套等。
4． 本試劑盒適用于檢測活細胞，流式細胞儀檢測時，細胞數(shù)量不以應低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
五、操作方法
1． 懸浮細胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細胞用胰酶消化收集用PBS洗滌細胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細胞；
2． 加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應5～15min；
3． 加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細胞；
4． 請在1 hour內，進行下述熒光顯微鏡或流式細胞儀的觀察和檢測。
A． 熒光顯微鏡觀察
1． 滴一滴上述染色后的細胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細胞；
2． 對于貼壁細胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細胞并誘導細胞凋亡；
（1） 將細胞于蓋玻片上生長，用適當?shù)牡蛲稣T導劑誘導細胞凋亡，并設立陰性對照組；
（2） 用PBS洗滌細胞兩次；
（3） 在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4） 將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5） 避光、室溫反應5 min。
3． 將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號呈紅色。
B． 流式細胞儀分析
用流式細胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
