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DAPI （4,6-Diamidino-2-phenylindole，4,6-二氨基-2-苯基吲哚）是一種DNA特異性染料，與DNA產(chǎn)生非嵌入式結(jié)合，發(fā)出藍(lán)色熒光。該染料對(duì)細(xì)胞膜有半通透性，可透過正?；罴?xì)胞產(chǎn)生較弱的藍(lán)色熒光（細(xì)胞固定后熒光增強(qiáng)），而凋亡細(xì)胞的膜通透性增加，對(duì)其攝取能力增強(qiáng)，產(chǎn)生很強(qiáng)藍(lán)光染色。并且正常細(xì)胞的核形態(tài)呈圓形，邊緣清晰，染色均勻，而凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核邊緣不規(guī)則，細(xì)胞核染色體濃集，著色較重，并伴有細(xì)胞核固縮，核小體碎片增加，因此從熒光強(qiáng)度及核形態(tài)均可鑒別出細(xì)胞發(fā)生凋亡的典型特征。

二、試劑盒組份

組份	KGA215（100 assays）	儲(chǔ)存條件
DAPI染液	10 mL	4℃，避光
Buffer A	25 mL	4℃

三、試劑盒以外自備儀器和試劑

熒光顯微鏡、低速離心機(jī)、微量移液器、1.5m L Microtube、載玻片、蓋玻片、甲醇

四、操作方法

1. 將DAPI染液用甲醇稀釋10-20倍，制備成1-2μg/mL的DAPI工作液（4^oC避光保存6個(gè)月）；

2. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞爬片觀察

2.1 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞爬片棄去培養(yǎng)基，加500μL的DAPI工作液洗一次；

2.2 再滴加入500μL的DAPI工作液，37℃染色15 min；

2.3 棄去染色液，甲醇漂洗一次，

2.4 滴加甘油或Buffer A，熒光顯微鏡以340/380nm紫外光激發(fā)，500×（40×12.5）（是100×油鏡頭）觀察、拍照；

3. 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞觀察

3.1 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞離心收集后，加500μL的DAPI工作液洗一次；

3.2 再加入500μL的DAPI工作液重懸細(xì)胞，37℃染色15 min；

3.3 離心收集細(xì)胞，棄去染色液；

3.4 加入Buffer A重懸細(xì)胞，滴加于載玻片上；

3.5 熒光顯微鏡以340/380nm紫外光激發(fā)，500×（40×12.5）（是以100 ×油鏡頭）觀察、拍照。

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