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魚膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）定量檢測試劑盒（ELISA）

使用說明書

僅供科研使用，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

使用前仔細(xì)閱讀本說明書。

用    途： 用于定量檢測魚血清、血漿及相關(guān)液體樣本中膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）的含量。

工作原理

本試劑盒采用雙位點夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），測定樣品中魚膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）的水平。向預(yù)先包被魚膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）抗體的酶標(biāo)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和HRP標(biāo)記的魚膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）抗體，經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的組分，然后再加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中兔子魚膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成

注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml

需要而未提供的試劑和器材

1．  37℃恒溫箱。

2．  標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

3．  精密移液器及一次性吸頭

4．  蒸餾水，

5．  一次性試管

6．  吸水紙

注意事項

1．  從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．  各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差

3．  建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。

4．  嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

5．  為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

6．  不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7．  底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中

標(biāo)本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作程序

1．  分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl；在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動混勻，37℃溫育60分鐘。

2．  棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。

3．  每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

4．  取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

5．  測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

6．  根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

操作程序總結(jié)：

準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

加入準(zhǔn)備好的樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)60分鐘

洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD值

計算

檢測范圍：7.8-500pg/ml。

規(guī)格：    96T/盒

保存：    2-8℃

有效期：  6個月（2-8℃）。