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天津譜祥偉業(yè)科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第13年

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液相色譜方法優(yōu)化——色譜柱的優(yōu)化

時(shí)間:2024/7/25閱讀:367
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液相方法優(yōu)化中的色譜柱的優(yōu)化就是色譜柱的選型。選型的原則無非就是根據(jù)分析物的性質(zhì)、流動(dòng)相的條件、初步分離的結(jié)果等來選擇合適的色譜柱。



   強(qiáng)極性樣品對(duì)于強(qiáng)極性的樣品,C18色譜柱保留弱,可以選擇碳含量更高的C18;或者選用親水的AQ C18,用純水相洗脫,會(huì)增強(qiáng)保留;再或者選用HILIC模式色譜柱。

 

弱極性樣品

 

對(duì)于弱極性的樣品,C18色譜柱保留很強(qiáng)或常規(guī)有機(jī)相洗脫不下來,可以嘗試碳含量更低的色譜柱,或者苯己基,C8,C4等。

 

易污染樣品

 

對(duì)于中藥類或生物類樣品,色譜柱容易被污染,可以嘗試大孔徑填料色譜柱更耐污染;

 在分離度要求不高的前提下,也可以用粒徑更大的色譜柱,柱壓較低,隨著污染柱壓升高的空間比較大;

對(duì)于分離要求高,且容易柱壓高的分離項(xiàng)目,可以嘗試粒徑更大的實(shí)心核填料的色譜柱,柱效與小粒徑填料的色譜柱相當(dāng),柱壓更低。

對(duì)于易污染色譜柱的樣品,可以的話盡量多做一些樣品前處理工作。

 

大分子樣品

 

對(duì)于大分子的分析物,尤其是空間結(jié)構(gòu)大,比如多肽、蛋白、核酸,聚合物等,選用大孔徑填料的色譜柱。

 

樣品pKa


我們通常根據(jù)分析物的pKa來選擇流動(dòng)相的pH,如果分析物pKa小于7,那么流動(dòng)相pH應(yīng)選擇低于pKa-2,如果pKa大于7,那么流動(dòng)相pH應(yīng)選擇高于pKa+2,但常規(guī)的硅膠基質(zhì)色譜柱耐受pH范圍為2-6,我們就根據(jù)流動(dòng)相的pH來選擇可耐受相應(yīng)pH的色譜柱。

 

高柱溫


如果柱溫要求超過50℃,需要選擇耐高溫的色譜柱。


分離度差


對(duì)于分離度差的結(jié)果,我們可以嘗試增加柱長,來提高分離度。

塔板數(shù)低對(duì)于塔板數(shù)低的結(jié)果,我們嘗試減小色譜柱內(nèi)徑或填料粒徑,來提高柱效。

 

 

塔板數(shù)低


對(duì)于塔板數(shù)低的結(jié)果,我們嘗試減小色譜柱內(nèi)徑或填料粒徑,來提高柱效。

 

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