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中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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奧林巴斯生物顯微鏡

時(shí)間:2013-5-22閱讀:1418
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 奧林巴斯生物顯微鏡——掃描電鏡標(biāo)本制備方法

 

 
奧林巴斯生物顯微鏡掃描電鍍是用來觀察樣品表面的結(jié)構(gòu)。二次電子象反映了樣品表面的形貌。因此對(duì)掃描電鏡標(biāo)本的*個(gè)要求是把待觀察的表面完整無損的暴露出來,固定好。
 
奧林巴斯生物顯微鏡與透射電鏡一樣,掃描電鏡標(biāo)本也是在真空中進(jìn)行觀察,因此必須干燥,而且干燥后樣品表面不變形。這是對(duì)樣品的第二個(gè)要求。生物樣品含水較多,干燥后容易皺紹。因此,在掃描電鏡標(biāo)本制備中有些特殊的干燥方法。
 
觀察時(shí),電子束在樣品表面逐點(diǎn)掃描。一般情況下,入射電子數(shù)多于從樣品表面發(fā)出納電子數(shù),因而便有電子在樣品上聚集,如標(biāo)本不導(dǎo)電,則聚集的電子將會(huì)放電產(chǎn)生干擾信號(hào)。生物組織多由低原子序數(shù)的碳、氫、氧、氮等元素組成,導(dǎo)電性差而電阻較高。因此,對(duì)掃描電鏡標(biāo)本的第三個(gè)要求是樣品導(dǎo)電。為此,又需做特殊的處理。
 
下面就這三方面要求分別加以介紹。
 
掃描電鎊觀察的表面一般是組織或器官的自然表面,如呼吸邏,消化道,泌尿及生殖管道的上皮表面。機(jī)體中分散細(xì)胞的自然表面以及骨胳等硬組織的自然面等。取材時(shí),對(duì)于待觀察的部分要保護(hù)好,切勿用器械觸碰。如果上面粘有分泌物,粘濃或糞塊等污物,必須在固定前去除,以免遮蓋表面微紉結(jié)構(gòu),清除的方法一般是用溫生理鹽水或緩沖液沖洗或噴射沖洗,硬組織可用超聲波(低頻)清洗。有的實(shí)驗(yàn)室用蛋白酶類清洗表面的粘液,但必須注意,蛋白酶不僅可除去表面粘附物,也可破壞樣品表面的蛋白質(zhì)。對(duì)于分散細(xì)胞表面的處理參見另一節(jié)。需特別提出的是,暴露出的表面需要清洗,但保存標(biāo)本的原則與透射電鏡標(biāo)本*相同;如動(dòng)物處死方法,取材速度及要求樣品中斷血液供應(yīng)后1—2分鐘內(nèi)進(jìn)入團(tuán)定液等。與透射電鏡標(biāo)本*不同的一點(diǎn)是樣品體積可大些。由子樣品臺(tái)較大,景深較深,掃描電鏡樣品塊可在10mm見方,5mm高的范圍。
 
電鍍標(biāo)本必須干燥。我們觀察樣品是觀察細(xì)胞表面的原貌,富有微細(xì)結(jié)構(gòu)的樣品表面往往經(jīng)過脫水及干燥后(特別是空氣中干燥后)發(fā)生嚴(yán)重變形。原因是液價(jià)(特別是水)的表面張力破壞了微紉結(jié)構(gòu)。雖然有些可揮發(fā)介質(zhì)如乙醇或丙圍的表面張力較小,但對(duì)類如氣管上皮表面纖毛這樣的細(xì)微結(jié)構(gòu)仍有損傷。因此,自掃描電鏡問世后,雖然不少學(xué)者擬用于觀察生物樣品,就是因?yàn)檫^不好“干燥”這一關(guān)而未曾得到好的生物軟組織的掃描電鍍照片。自從1969年開始使用臨界點(diǎn)于操法后,將掃描電鏡的生物樣品制備大大推進(jìn)了一步。目前世界上電鏡實(shí)驗(yàn)室多應(yīng)用臨界點(diǎn)干燥法與冷凍干燥法對(duì)掃描電鏡進(jìn)行干燥。
 
備注:——掃描電鏡標(biāo)本制備方法部分文章由https://www.cnnoptics.com/編輯上傳。
 

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