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中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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熒光顯微鏡分類及鏡檢術(shù)注意事項(xiàng)

時(shí)間:2014-7-10閱讀:2403
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  熒光顯微鏡是用短波長(zhǎng)的光線照射用熒光素染色過的被檢物體,使之受激發(fā)后而產(chǎn)生長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光,然后觀察。熒光顯微鏡廣泛應(yīng)用于生物等領(lǐng)域。

  (1)熒光顯微鏡一般分為透射和落射式兩種類型:

  a.透射式:激發(fā)光來自被檢物體的下方,聚光鏡為暗視野聚光鏡,使激發(fā)光不進(jìn)入物鏡,而使熒光進(jìn)入物鏡。它在低倍情況下明亮,而高倍則暗,在油浸和調(diào)中時(shí),較難操作,尤以低倍的照明范圍難于確定,但能得到很暗的視野背景。透射式不使用于非透明的被檢物體。

  b.落射式:透射式目前幾乎被淘汰,新型的熒光顯微鏡多為落射式,光源來自被檢物體的上方,在光路中具有分光鏡,所以對(duì)透明和不透明的被檢物體都適用。由于物鏡起了聚光鏡的作用,不僅便于操作,而且從低倍到高倍,可以實(shí)現(xiàn)整個(gè)視場(chǎng)的均勻照明。

  (2)熒光鏡檢術(shù)的注意事項(xiàng):

  a.激發(fā)光長(zhǎng)時(shí)間的照射,會(huì)發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象,因此盡可能縮短觀察時(shí)間,暫時(shí)不觀察時(shí),應(yīng)用擋板遮蓋激發(fā)光。

  b.作油鏡觀察時(shí),應(yīng)用"無熒光油"。

  c.熒光幾乎都較弱,應(yīng)在較暗的室內(nèi)進(jìn)行。

  d.電源裝穩(wěn)壓器,否則電壓不穩(wěn)不僅會(huì)降低汞燈的壽命,也會(huì)影響鏡檢的效果。

  目前許多新興生物研究領(lǐng)域應(yīng)用到熒光顯微鏡,如基因原位雜交(fish)等等。

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