腺病毒單克隆抗體
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本司長期供應(yīng)尼古?。商鎸帲z測試劑盒,其主要品牌包括美國NovaBios、廣州健侖、廣州創(chuàng)侖等進(jìn)口產(chǎn)品,國產(chǎn)產(chǎn)品,試劑盒的實驗方法是膠體金方法。
【詳細(xì)說明】
腺病毒單克隆抗體
廣州健侖生物科技?有限公司
本司長期供應(yīng)尼古?。商鎸帲z測試劑盒,其主要品牌包括美國NovaBios、廣州健侖、廣州創(chuàng)侖等進(jìn)口產(chǎn)品,國產(chǎn)產(chǎn)品,試劑盒的實驗方法是膠體金方法。
我司還有很多違禁品檢測、激素檢測、疫病類檢測、腫瘤標(biāo)志物檢測等抗原抗體原料,還有熒光FITC標(biāo)記類抗體、各種可標(biāo)記單抗以及免疫磁珠等等產(chǎn)品以及各種生物原料和質(zhì)控品等,。
我司還提供其它進(jìn)口或國產(chǎn)試劑盒:登革熱、瘧疾、流感、A鏈球菌、合胞病毒、腮病毒、乙腦、寨卡、黃熱病、基孔肯雅熱、克錐蟲病、違禁品濫用、肺炎球菌、軍團(tuán)菌、化妝品檢測、食品安全檢測等試劑盒以及日本生研細(xì)菌分型診斷血清、德國SiFin診斷血清、丹麥SSI診斷血清等產(chǎn)品。
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【公司地址】 廣州清華科技園創(chuàng)新基地番禺石樓鎮(zhèn)創(chuàng)啟路63號二期2幢101-3室
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3.鏈接同轉(zhuǎn)化反應(yīng)
將純化產(chǎn)物鏈接至pGEM-T載體(Promega,USA),并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化到感受態(tài)大腸桿菌DH5α中,具體用步驟如下。
1)鏈接反應(yīng)
a.短暫離心裝有載體嘅離心理,以免液體掛喺理壁上;
b.將反應(yīng)體系加200ul嘅離心理,10ul反應(yīng)體系具體加量如下:2xRapid Ligation Buffer 5ul,pGEM-T載體lul,PCR產(chǎn)物3ul,T4 DNA Ligase 1ul;
c.用槍頭吸打撈勻反應(yīng)體系,4℃放置過夜反應(yīng)。
2)轉(zhuǎn)化反應(yīng)
a.由-70℃柜中拎出感受態(tài)細(xì)胞DH5α,雪上放置10min解凍,輕彈理壁以撈勻細(xì)胞;
b.短暫離心鏈接反應(yīng)理,攞曬量或者一半體積嘅鏈接反應(yīng)物于解凍后嘅感受態(tài)細(xì)胞中輕彈撈勻,凍水浴40min,中間浪一次,防止菌體沉淀;
c.拎出離心理,于42℃水浴90sec熱休克;
d.冰浴2min;
e.離心理中加900ul LB培養(yǎng)液(AMP-)(無菌用);
f. 37℃馴品噉振浪2h,令細(xì)菌復(fù)蘇;
g. 4000rpm常溫10min離心,反而去上清,保留150ul左右,吹吸令菌體重溶,往菌液中加3.5ul 200mg/mL IPTG同60ul二十mg/mL X-Gal撈勻,將撈液體扠于預(yù)早處理好嘅帶有Amp嘅平板培養(yǎng)基上,等吸走啲后倒置放入37℃烘箱中,培養(yǎng)12-16h,觀察藍(lán)白菌落;
h.羅滅菌嘅10 mL試管若干,加約3 mL左右嘅LB培養(yǎng)液(Amp);
i.用滅菌牙簽小心挑取白色菌落,置于試管中;
j. 37℃,250rpm/min振蕩培養(yǎng)過夜,至溶液混濁;
k.將經(jīng)過培養(yǎng)后嘅菌體直接進(jìn)行PCR檢測。
4.序列測定
經(jīng)PCR檢測后將陽性克隆用于測序。所有測序工均由大連TaKaRa公司做,選用377測序儀。個個地理種群隨機(jī)撍3個樣本進(jìn)行測序,以佢哋嘅*序列為準(zhǔn)。
5.序列分析
獲得嘅DNA序列先提交到GenBank數(shù)據(jù)庫中,然后利用“BLAST”,工具(NCBI站點)進(jìn)行序列分析、DNA序列檢索;用GenDoc軟件進(jìn)行序列同源性比較;用BioEdit軟件進(jìn)行序列老編;用Clustal X軟件(Thompson等,1997)進(jìn)行序列比對(alignment);比對結(jié)果輸入MEGA2.1軟件(Kumar等,2001),采用腳法計算多唔同種類品間嘅遺傳腳,并基于Kimura-2 Parameter模型,用鄰接法(Neighbor-Joining,NJ)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,通過自展1000次檢驗獲得系統(tǒng)樹分支嘅置信度。
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