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ASFV檢測(cè)肉制品廠的非洲豬瘟檢測(cè)方案

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  • 廣州健侖生物科技有限公司
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ASFV檢測(cè)肉制品廠的非洲豬瘟檢測(cè)方案

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(4)按1%的比例(v/v)加入*,37°C振蕩30min。
(5)按5.84g/100ml加入NaCl,混勻溶解,冰浴1h,10000g離心10min,去細(xì)菌碎片,收集上清。
(6)加入固體PEG 8000至終濃度10%(w/v),充分振蕩溶解,冰浴1h,使噬菌體顆粒形成沉淀,4°C 12000g離心10min,棄上清。
(7)按每100ml原始菌液加2ml的比例,加入TM緩沖液重懸沉淀。
(8)加等體積*,振蕩30 sec,5000g離心10min,收集上層水相。
(9)再用等體積*抽提1次,得到噬菌體的粗制顆粒。
二、噬菌體基因組DNA的提取
(1)在粗制的噬菌體顆粒中加入DNase I至終濃度5μg/ml,RNase A至1μg/ml,37°C水育1h,以降解殘留的來(lái)源于宿主菌的核酸。
(2)加入EDTA (pH8.0)至終濃度20mmol/l,滅活DNase I。
(3)加蛋白酶K至終濃度50μg/ml,SDS至終濃度0.5%,混勻,56°C水浴1h,裂解噬菌體。
(4)加入等體積飽和酚 (pH8.0)抽提,5000g離心10min,收集上層水相。
(5)加入等體積*抽提,5000g離心10min,收集上層水相。

    
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