聯(lián)系電話
北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責任公司
中級會員·12年
- 聯(lián)系人：
- 譚柳
- 電話：
- 010-62210403
- 手機：
- 13146220038
- 傳真：
- 86-010-89756821
- 地址：
- 北京昌平區(qū)北七家鎮(zhèn)東沙工業(yè)園384號
- 個性化：
- www.dingguocs.com
- 手機站：
- m.dingguocs.com
- 網(wǎng)址：
- www.dingguocs.com
掃一掃訪問手機商鋪
核苷酸類似物N4-甲基-2′-脫氧胞苷5′-三磷酸用于高GC含量 DNA的PCR擴增
采用標準的脫氧核苷三磷酸體系或體系中的dCTP部分或者全部被其N4甲基化類似物——N4甲基-2′-脫氧胞苷5′-三磷酸（N4me-dCTP）所代替的混合體系，用Taq DNA聚合酶進行高GC含量DNA的PCR擴增。用以上兩種反應體系來擴增一段高GC含量（GC 含量為78.9%）的DNA片段，含有N4me-dCTP的PCR體系擴增出了高產(chǎn)量的目的片段，而包含標準核苷酸的反應體系則產(chǎn)生了大量的非特異性擴增。在對另一段高GC含量（GC含量為 80.6%）DNA的擴增中，只有含有N4me-dCTP的PCR反應體系所擴增出的目的片段經(jīng)凝膠純化后進行二次擴增獲得了目的產(chǎn)物。在一個高GC含量模板的直接PCR的比較中，含有N4me-dCTP的反應體系明顯地比含有各種有機添加劑的標準核苷酸體系表現(xiàn)出更好的擴增效果，據(jù)報道這些有機添加劑（二甲基亞砜，甜菜堿，乙二醇）能夠解決一些DNA二級結(jié)構(gòu)研究中遇到的難題。在中等GC含量的DNA片段的PCR擴增中，檢測到核苷酸類似物在合成每一個目的擴增產(chǎn)物時的解鏈溫度（Tm）明顯地低于專一使用標準核苷酸合成相同擴增產(chǎn)物時的Tm值。
原文：
Cyntia R. Flores-Juárez, Eva González-Jasso et al, PCR amplification of GC-rich DNA regions using the nucleotide analog N 4 -methyl-2´-deoxycytidine 5´-triphosphate. BioTechniques 61:175-182 (October 2016).
