化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
ELISA結(jié)果影響因素都有哪些?你知道嗎?
閱讀：3324 發(fā)布時間：2017-3-16ELISA試驗以操作簡單、靈敏度較高、特異性較好的特點在科研領(lǐng)域上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果都有影響,操作不當將引起較大的誤差。下面給大家簡單的講解一下步驟中的影響因素及解決辦法。
加樣
可能原因：1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣； 2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)； 3.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
解決辦法：1.標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2.加樣后及時放入孵箱。 3.加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4.如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5.標本較多時，請分批操作。
溫育
可能原因：1.孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 2.孵育時間人為延長，導致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。
解決辦法：1.貼封片或加蓋； 2.按說明步驟嚴格控制操作時間。
洗滌
可能原因：1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2.采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導致洗板效果差。 3.反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。
解決辦法：1.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2.合理安排，或多用幾臺洗板機。
顯色
可能原因：1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
解決辦法：1. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2. 加樣時保持顯色劑不外流； 3.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
終止
可能原因：加終止液時產(chǎn)生較多氣泡，導致假陽性增加。
解決辦法：加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
讀板
可能原因：讀板時板底不清潔。
解決辦法：應(yīng)保證酶標板清潔。
上海恒遠溫馨提醒：整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。