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如何做好ELISA實驗?
閱讀：1001 發(fā)布時間：2021-1-29在生產(chǎn)過程中，不同批次的試劑的質(zhì)量，保證*一致非常困難，ELISA試劑盒甚至通過批檢驗項目和結(jié)果也不同，因此必須選擇和訂購試劑長批次，并確保小鼠ELISA試劑盒保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行本標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號變化與質(zhì)量控制系統(tǒng)和復(fù)雜的過程，重新評價試劑重新建立，并能保證結(jié)果的穩(wěn)定性；有效期短，使用率低的試劑，應(yīng)小包裝，包裝，可每次都是采取，以避免重復(fù)凍融破壞試劑引起的。
在Elisa試劑盒的使用過程中常見問題有很多如， 加樣器不確；尤其10ul以下的加樣器，對結(jié)果影響很大； 保溫設(shè)備不良； 洗滌用水不規(guī)范。
如何解決這些問題呢：
1在使用過程校正加樣器；10ul以下加樣器采用進口產(chǎn)品（芬蘭、法國等）；
2 仔細(xì)校正溫度到37℃，水浴箱為佳；
3 必須使用去離子水或蒸餾水，不得用自來水、礦泉水等；
4 認(rèn)真閱讀使用說明書。
樣品加樣：
1 加樣不準(zhǔn)確； 2 沒有混勻。 加樣時一定要仔細(xì)。加樣后，再檢查，以防漏加、錯加。
2 加樣后，反復(fù)抽吸3次混勻，防止血清聚集孔底，導(dǎo)致非特異性吸附。 洗滌 洗滌不* ①每次注水洗滌，應(yīng)靜止30秒鐘；②選用吸水紙作為襯墊，每次洗滌后扣干孔內(nèi)水分；
3 可選用塑料洗滌瓶。 加酶反應(yīng) 漏加 滴加后，認(rèn)真檢查各孔 結(jié)果判斷 ①包括陰性對照孔在內(nèi)，各孔顯色普遍偏深；②包括陽性對照在內(nèi)，各孔均無顯色；③陽性對照不顯色，而其它樣本顯色正常；
4 有些標(biāo)本顯色不深，判斷陽性困難。 ①可能是洗滌不充分；加樣過量；溫育時間過長溫度過高；按說明書重新操作。如無改善， 可與生產(chǎn)廠家聯(lián)系；②可能是漏加樣本或酶液；溫育時間過短溫度過低；試劑保存不當(dāng)活性下降；按說明書重新 操作。如無改善，可與生產(chǎn)廠家聯(lián)系；③陽性對照漏加、錯加或失效。重新操作。如無改善，可與廠家聯(lián)系，索要對照品； ④重新操作。使用酶標(biāo)儀，測定光吸收度，按P/N值標(biāo)準(zhǔn)判斷。 ELISA試劑盒保存 保存不規(guī)范 一定要在2-8℃存放。不得過高，也不得凍存（凍存后，酶液將失效）。 對照品 對照品為凍干品 按對照管標(biāo)示，加入相應(yīng)體積的去離子水或蒸餾水復(fù)溶，充分溶解混勻?？砂凑f明書使用。
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