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競爭法ELISA中,主要兩種計算方法

閱讀:998          發(fā)布時間:2023-2-27


在競爭法ELISA中,陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量,一般調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間,此時反應最為敏感。

競爭法ELISA不易用自視判斷結(jié)果,因肉眼很難辨別弱陽性反應與陰性對照的顯色差異,一般均用比色計測定,讀出S、PN的吸光值。計算方法主要也有兩種,即陽性判定值法和抑制率法。

a. 陽性判定值法

與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同,ELISA試劑盒但在計算公式中引入陽性對照A值,現(xiàn)舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復鈣人血漿,陽性對照中抗HBc含量為125±100u/ml。每次試驗設2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后,先計算陰性對照A值的平均值(NCX)和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX),兩個平均數(shù)的差(N-P)必須大于一個特定的數(shù)值(例如0.300,試驗才有效。3個陰性對照A值均應小于2.000,而且應≥0.5×NCX并≤1.5×NCX,如其中之一超出此范圍,則棄去,而以另2個陰性對照重新計算×NCX;如有2個陰性對照A超出以上范圍,則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算:陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX,標本A值≤陽性判定值的反應為陽性,A>陽性判定值的反應為陰性。

b. 抑制率法

抑制率表示標本在競爭結(jié)合中標本對陰性反應顯色的抑制程度,按下式計算:

抑制率(%= ELISA試劑盒(陰性對照A-標本A值)×100%/陰性對照A值,一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性,<50%為陰性。

 


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