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恒遠(yuǎn)生物|生化檢驗(yàn)中各種空白的概念
閱讀:309 發(fā)布時(shí)間:2024-4-18對(duì)所謂"試劑空白""樣本空白""水空白""杯空白"等"空白"名詞,下面和大家解釋說明一下:
1、試劑空白:
由于生化測(cè)試測(cè)量的吸光度為相對(duì)吸光度,所以從理論上來講,所有終點(diǎn)法的測(cè)試都需要把試劑本身的吸光度扣除(試劑本身的吸光度就是試劑空白)。在傳統(tǒng)手工法中,每次測(cè)定至少做三個(gè)管:測(cè)定管、標(biāo)準(zhǔn)管、空白管,其中空白管是試劑加蒸餾水,測(cè)出來也就是試劑空白。因?yàn)椴僮鳝h(huán)境、儀器狀態(tài)、試劑穩(wěn)定性等變異,所以要求每次都要測(cè)定試劑空白,稱為實(shí)時(shí)試劑空白。
在全自動(dòng)分析儀上,大都是模擬手工操作,許多全自動(dòng)分析儀為追求速度,在設(shè)計(jì)上采用折中方法來測(cè)定試劑空白。以日立全系列生化儀為例,該系列分析儀做不了實(shí)時(shí)試劑空白,因?yàn)樗鼈內(nèi)窍燃訕颖竞蠹釉噭?,為了折中,在定?biāo)時(shí)做一個(gè)試劑空白,保存起來,需要扣除試劑空白時(shí)再減這個(gè)預(yù)先保存的值。對(duì)于日立的這種試劑空白測(cè)定很多儀器都采用這種方法,也叫做試劑空白校準(zhǔn)。
在自動(dòng)生化儀上的試劑空白一般表現(xiàn)為零點(diǎn)吸光度,該吸光度是通過校準(zhǔn)確立的。
2、樣本空白:
由于溶血、脂血、黃疸等情況,會(huì)導(dǎo)致樣本本身的吸光度對(duì)測(cè)試結(jié)果造成影響。所以對(duì)樣本本身吸光度的測(cè)量,即樣本空白,可以去除這方面的影響,測(cè)量方法是按照正常測(cè)試的試劑和樣本量,把試劑換成蒸餾水或生理鹽水來進(jìn)行測(cè)量。自動(dòng)生化儀上,很難界定樣本空白。與消除樣本空白有關(guān)的大約有如下幾點(diǎn):
①在雙試劑測(cè)定時(shí),加入試劑和樣品后的吸光度可一定程度上扣除樣本空白。(故有單試劑不能扣除樣本空白的說法)。
②現(xiàn)在的試劑抗干擾能力都較強(qiáng),比如雙試劑,R1加入后先和樣本孵育一段時(shí)間,將血紅蛋白、脂肪、膽紅素等反應(yīng)掉,再加入R2開始測(cè)定反應(yīng),在一定范圍內(nèi)都可以消除樣本空白。
③現(xiàn)代全自動(dòng)生化儀大多采用雙波長(zhǎng)測(cè)定,雙波長(zhǎng)測(cè)定的原則是根據(jù)干擾組分和待測(cè)物質(zhì)吸收光譜的峰形特征,選擇兩個(gè)波長(zhǎng)和,使干擾組分在這兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸光系數(shù)相等,使待測(cè)物質(zhì)在兩波長(zhǎng)處的吸光系數(shù)有顯著差別。以兩波長(zhǎng)分別測(cè)定分析溶液的吸光度, 以兩個(gè)吸光度值之差(△A)計(jì)算。這也可以扣除一部分樣本空白。
④有些儀器,例如日立系列,有“血清信息"功能的設(shè)置,做法單獨(dú)占用一個(gè)空白通道來計(jì)算,叫做樣品空白校準(zhǔn)。
3、水空白:
比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意義主要是對(duì)光路系統(tǒng)進(jìn)行檢查和校正,如光源,比色杯等,同時(shí)在計(jì)算中起到消除“杯差"的作用。日立7060中的Cell Blank(杯空白)測(cè)定的就是水空白。