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恒遠(yuǎn)試劑盒技術(shù)支持讓ELISA實(shí)驗(yàn)更加精彩!
閱讀:1012 發(fā)布時(shí)間:2015-1-14不少朋友在為春節(jié)前的zui后一次實(shí)驗(yàn)認(rèn)真準(zhǔn)備著,而在實(shí)驗(yàn)的過程中大大小小的問題總會(huì)遇到一些。今天上午,一位來自上??蒲兴目蛻魧O老師來電與我公司技術(shù)專員交流ELISA實(shí)驗(yàn)問題。在交流的過程中,孫老師表示:
“做定量要驗(yàn)證試劑盒的線性范圍,目前我的盒子線性范圍太窄,線性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值為16。我嘗試了改變反應(yīng)模式,將線性范圍略擴(kuò)寬了一些——線性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值為32。如果高點(diǎn)往上一個(gè)梯度延伸,則R平方就只有0.96(已經(jīng)是的結(jié)果了)??偟膩碚f線性范圍還是太窄。我參考了其他一些廠家的ELISA定量試劑盒,基本上線性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值都≥64。我知道,ELISA的信號(hào)值范圍窄,但我想線性區(qū)間的高點(diǎn)與低點(diǎn)的濃度值比值≥64應(yīng)該還是可以的。那么如何才能將試劑盒的線性范圍擴(kuò)寬?"
對(duì)此,上海恒遠(yuǎn)技術(shù)專員分析解說到:試劑盒的線性范圍影響的主要因素應(yīng)該是抗體本身的性質(zhì),其次才是ELISA反應(yīng)的各種條件。如果在優(yōu)化了各種反應(yīng)條件下線性范圍還是很窄,只能說制的抗體不是很好。而線性范圍的影響有兩個(gè)因素,*個(gè)可能因素是本身抗體的親和力,親和力越高靈敏度越高,高點(diǎn)與低點(diǎn)比值也就越高,若標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率接近于1,抗體親和力還是可以的。比值沒有相關(guān)規(guī)定說一定要高于64。
第二個(gè)可能因素是本身抗原的影響。不同的蛋白ELISA其靈敏度都不相同,線性范圍也不同,如果你的項(xiàng)目在某一濃度達(dá)到平臺(tái)值,說明這個(gè)蛋白與其抗體結(jié)合與解離在此濃度下達(dá)到了平衡,改變其他條件也無法增加,除非改用化學(xué)發(fā)光法。若是同一種蛋白其線性范圍沒有其他盒子做的高,可嘗試改變條件降低其背景值從而降低低濃度來提高比值。
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