化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
上海恒遠重點分析一抗二抗的選擇
閱讀：2164 發(fā)布時間：2015-3-12 根據(jù)我公司技術(shù)員的總結(jié)了解，不少客戶對一抗、二抗的選擇方面甚是苦惱，您是否也正面對此問題而不知怎樣做呢？在今天的內(nèi)容里，上海恒遠為您重點分析一抗二抗的選擇。
通常情況下，某一特定的實驗中可能同時有幾種二抗可供選擇，如何能選擇到該實驗的二抗，需要綜合以下幾個方面進行考慮：
*、一抗的物種來源
一抗是在什么物種來源的，相應的二抗也要是抗該物種的抗體。例如，如果一抗是在小鼠體內(nèi)制備的，那么你就應當選擇抗小鼠的二抗，如果一抗是在兔體內(nèi)制備的，那么二抗就應當是抗兔的抗體。至于二抗本身是在什么動物中制備的對二抗的質(zhì)量并無明顯的影響。
第二、一抗是屬于哪個類或亞類
二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應的二抗就是抗IgG抗體.
單克隆抗體的類別及亞類通常會在產(chǎn)品列表中列出，如果你的一抗是小鼠IgM，那么相應的二抗就應當是抗小鼠IgM，或是抗小鼠IgG抗體。
如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3)，那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合，或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠IgG1，那么你可以選擇抗IgG1的二抗，此種抗體在雙標記實驗中尤其適合。
如果您不知道一抗是哪一類別或亞類，那么抗小鼠IgG是一個不錯的選擇，因為此種抗體可以識別大多數(shù)類型的IgG免疫球蛋白。
下面總結(jié)了幾種具有不同特異性的二抗：
針對整個抗體分子(H＋L)具有特異性：如anti-IgG(H+L)，此類抗體既可以與抗體的重鏈結(jié)合也可以與輕鏈結(jié)合，即與抗體分子的 Fc，F(xiàn)(ab’)2/Fab部分均可反應，anti-IgG(H+L)也可以與其他免疫球蛋白家族反應，因為所有的免疫球蛋白都具有相同的輕鏈。
針對Fab片段具有特異性：這類抗體與重鏈輕鏈均可以結(jié)合，由于它們可以與輕鏈反應，它們同時也已和具有相同輕鏈的其他種類的免疫球蛋白反應。
這對Fc片段或重鏈具有特異性：這類抗體和重鏈的Fc部分反應，一次它們是類別特異性的(即gamma鏈特異性抗體只與IgG反應，mu鏈特異性抗體只識別IgM，依此類推)。
輕鏈特異性：與所有類別的抗體反應，因為所有類別的抗體均具有相同的lambda鏈或kappa鏈。
經(jīng)過吸附處理的二抗：不同來源的免疫球蛋白含有相似的結(jié)構(gòu)，抗一個物種的抗體可能與其他物種發(fā)生交叉反應，一次有些二抗經(jīng)過了動物或人類IgG吸附處理，以減少非特異性背景。例如，如果是小鼠的組織或細胞，那么選擇經(jīng)小鼠血清或IgG吸附處理過的二抗可以減少非特異性結(jié)合。但是此種抗體識別表位的數(shù)量被大大減少。
第三、選擇哪種形式的二抗，是整個IgG分子，F(xiàn)(ab’)2片段，還是Fab片段？
整個IgG分子：此種抗體適用于多數(shù)情況。
F(ab’)2片段：該種抗體是由兩個靠二硫鍵連接的用于結(jié)合抗原的Fab片段組成，這些抗體用在特定的情況中，如需要避免抗體與具有Fc受體的細胞結(jié)合的情況。
Fab片段：它們只有一個結(jié)合位點，一般用來封閉內(nèi)源性免疫球蛋白。
第四、選用耦聯(lián)有哪種探針的二抗？
一般來講，耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP)，熒光基團(FITC, RRX, TR, PE)和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。對于western blot和ELISA，zui常用的二抗是酶標二抗，而細胞或組織標記實驗(細胞免疫化學，組織免疫化學，流式細胞術(shù))中通常使用熒光基團標記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過氧化酶或堿性磷酸酶標記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測信號，可以使用biotin/avidin檢測系統(tǒng)。
第五、抗體的純度：
親和層析純化的抗體一般更受人們歡迎，因為這些產(chǎn)品的純度zui高，產(chǎn)生的非特異性背景zui少。但是有些情況下也要考慮到純化過程中損失的IgG部分，因為其中含有親和力很高的抗體，尤其是當目的抗原存在的量很小的時候，高親和性的IgG部分就顯得尤為重要。