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上海恒遠(yuǎn)教您細(xì)胞凍存融化怎樣操作
閱讀：1344 發(fā)布時(shí)間：2015-10-21 細(xì)胞凍存融化的原則是緩凍速融細(xì)胞凍存（慢）
1.預(yù)先配制凍存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存預(yù)冷；
2.用胰酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化：倒去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基或用槍小心吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，PBS沖洗兩次，用胰酶消化細(xì)胞（盡可能溫和）；
3.將預(yù)冷的凍存液懸浮細(xì)胞，用滴管輕輕吹打混勻。
4.在每支凍存管中加入1ml細(xì)胞液，密封后標(biāo)記凍存細(xì)胞名稱和凍存日期。
5.凍存步驟的細(xì)致直接關(guān)系到細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)的活力，如果有程序降溫器（放在-80℃冰箱一整夜，放入液氮罐）；或者可以在4℃，2h；然后轉(zhuǎn)到-20℃，2h；-80℃，2h；放入液氮罐。
細(xì)胞凍存管融化（快）
1.將細(xì)胞凍存管取出，浸入37℃水浴鍋內(nèi)，輕輕晃動(dòng)，注意融化，當(dāng)融得只剩一個(gè)小冰塊時(shí)，將細(xì)胞插入冰中。
2.加入4℃預(yù)冷的培養(yǎng)基，用手指輕彈懸浮細(xì)胞團(tuán)。
3.250g離心10min，去除上清液，再加入培養(yǎng)基，輕輕懸浮。
4.盡量將細(xì)胞中的DMSO洗去，計(jì)數(shù)。
在細(xì)胞凍存過(guò)程中，所結(jié)的冰晶對(duì)細(xì)胞傷害較大，所以過(guò)程一定要慢，DMSO能減少冰晶傷害。
在細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程中，要快，以減少融化對(duì)細(xì)胞的傷害，其實(shí)還是冰晶的問(wèn)題。DMSO浸潤(rùn)的細(xì)胞非常脆弱，所以可要盡快將DMSO去除，一定要輕。
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