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ELISA法測定肺炎衣原體實驗步驟
閱讀：623 發(fā)布時間：2014-4-16| 提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 52.8KB |
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實驗中所需要用到的試劑：
| 1、濃縮酶聯(lián)物； | 5、弱陽性對照； |
| 2、標(biāo)本稀釋液； | 6、預(yù)包被微孔板； |
| 3、終止液； | 7、底物A、B； |
| 4、陽性對照； | 8、陰性對照。 |
實驗檢驗過程：
1、配制洗滌液 l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內(nèi)可置室溫環(huán)境中，長期可存于2—8℃環(huán)境中。
2、配制酶聯(lián)物 按1：101倍稀釋，即取1u1濃縮酶聯(lián)物加酶聯(lián)物稀釋液1 000ul(根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定稀釋量)，未用完的丟棄。
3、待試劑盒平衡至室溫后，待測標(biāo)本按1；51稀釋，即取4tA血清與200u1標(biāo)本稀釋液混合。
4、將稀釋標(biāo)本置37℃環(huán)境中20min。
5、各加100ul陽性、弱陽性、陰性對照及已稀釋待測標(biāo)本上清液于相應(yīng)孔中，空白對照孔加100u1標(biāo)本稀釋液，蓋好反應(yīng)板，置37℃環(huán)境中30min。
6、甩盡板中液體，每孔用200～300ul洗滌液洗5次，每次均需拍干。
7、每孔加酶聯(lián)物100~1，蓋好反應(yīng)板，置37℃環(huán)境中30min。
8、甩盡板中液體，洗5次，每次拍干。
9、加底物A、B各1滴或各50tzl，混勻，置37℃環(huán)境中15min。
10、取出，加終止液1滴，用酶標(biāo)儀450nm測其OD值。若肉眼觀察則不加終止液，直接判斷結(jié)果。
實驗過后，我們要做一個結(jié)果判斷：
1、陰性對照平均OD值須小于0．20。
2、弱陽性對照平均OD值須在0．20—0．65。
3、弱陽性對照與陰性對照的平均OD值之比須≥2。符合以上3個條件時，本試驗結(jié)果可信，否則重復(fù)實驗。
4、若待測標(biāo)本孔顯色比弱陽性對照孔深則判為陽性，反之為陰性。但在弱陽性對照值上下10％范圍內(nèi)再測1次，如確實高于弱陽性對照則可判為陽性。