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雌、雄性大鼠局灶性腦缺血 － 再灌注早期腦損傷的研究* ＊
郭淑娟1，王琮民2＊＊
(1． 邯鄲市中心醫(yī)院 老年病科，河北 邯鄲 056001; 2． 河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院 神經(jīng)內(nèi)科，河北 邯鄲 056000)
［摘 要］目的: 研究性別對局灶性腦缺血 － 再灌注大鼠早期腦損傷的影響。方法: 隨機(jī)取雌、雄健康 SD 大鼠各 12 只，分別記為 F 組和 M 組，采用栓線法制作大鼠中動(dòng)脈栓塞模型，于缺血 2 h 再灌注 24 h 后斷頭取腦，采用 TTC 染色并測量各組大鼠腦梗死體積，采用新型熒光探針 H2DCF-DA 監(jiān)測大鼠腦內(nèi)活性氧自由基(ROS)陽性細(xì)胞數(shù)目并檢測平均熒光強(qiáng)度。結(jié)果: 缺血 2 h 再灌注 24 h 內(nèi)，F(xiàn) 組和 M 組大鼠的死亡率分別為 8. 33 % 和16. 77 % ，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞ 0. 05);TTC 染色顯示，F(xiàn) 組腦梗死體積為(21. 42 ± 3. 54)% ，M 組為(40. 01 ±4. 92)% ，F(xiàn) 組小于 M 組 (P ＜ 0. 05);H2DCF-DA 染色顯示，F(xiàn) 組和 M 組的腦缺血半暗帶區(qū) ROS 陽性細(xì)胞數(shù)目分別為 8. 56 ± 1. 89 和 19. 04 ± 1. 37，F(xiàn) 組少于 M 組(P ＜ 0. 05)，平均熒光強(qiáng)度分別為 20. 58 ± 0. 89 和 39. 25 ± 1. 41，F(xiàn) 組少于 M 組(P ＜ 0. 05)。結(jié)論: 雌鼠缺血 － 再灌注損傷在短期內(nèi)較輕，其機(jī)制可能與雌性大鼠腦組織抑制氧
自由基能力較強(qiáng)有關(guān)。［關(guān)鍵詞］性別因素; 腦缺血; 腦梗死; 體積; 氧自由基缺血性腦卒中一般是指由于腦動(dòng)脈粥樣硬化引起血管腔狹窄或*閉塞，導(dǎo)致局部腦血流中斷，腦細(xì)胞缺血缺氧軟化壞死的疾病。缺血性腦卒中的危害性大，*低，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量［1］。有報(bào)道指出，絕經(jīng)前女性的腦卒中發(fā)病率低于同齡男性，而且對缺血損傷的耐受性高，但絕經(jīng)后女性的腦卒中發(fā)生率顯著增加，提示雌激素水平變化與缺血性腦病的發(fā)生發(fā)展可能有一定關(guān)系［2］。有研究發(fā)現(xiàn)雌激素可促進(jìn)卒中后的腦神經(jīng)再生，有利于神經(jīng)功能恢復(fù)［3］。以往多采用去卵巢或絕經(jīng)的雌性大鼠觀察雌激素對缺血性腦卒中的影響［4 － 6］，但對同等損傷程度、正常生理激素水平及性別因素是否會(huì)對缺血性腦卒中產(chǎn)生影響，特別是缺血 － 再灌注短期內(nèi)的影響鮮有報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)探討正常生理激素水平下性別對局灶性腦缺血 －再灌注大鼠早期腦損傷的影響。
1 材料與方法
1. 1 試驗(yàn)設(shè)備及試劑呼吸機(jī)(CWE 公司，美國)、DGD-300S 雙極電凝 (Sigma 公司，美國)、反饋式溫度調(diào)節(jié)儀(CZ 公司，美國)、透射電鏡(Olympus 公司，日本)、BH-2手術(shù)顯微鏡 ( Olympus 公司，日本)、高速離心機(jī)(Beckman 公 司，美 國); TTC ( 上 海 恒 遠(yuǎn) 公 司)、H2DCFA-DA 試劑盒(CWE 公司，美國)，水合氯醛(10% )、磷酸二氫鈉等。
1. 2 試驗(yàn)動(dòng)物及模型制作成年 SD 雌、雄大鼠各 12 只，分別記為 F 組和M 組，體質(zhì)量 250 ～ 300 g，許可證號 SYXK( 冀)2014 － 0038，采用標(biāo)準(zhǔn)配方飼料分籠飼養(yǎng)，室溫 22～ 25 ℃，術(shù)前禁食，自由進(jìn)水。大鼠用 10% 水合氯醛腹腔注射麻醉(3. 5 μL /g)，取頸部正中切口，上切至頸與下頜反折處，下切至胸骨角，剪開闊筋膜，找左側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA) 分叉、分離左側(cè)頸外動(dòng)脈(ECA) 和頸內(nèi)動(dòng)脈( ICA)，結(jié)扎 ECA 遠(yuǎn)心端，離斷，CCA 和 ICA 用動(dòng)脈夾夾閉，在 ECA 上剪“V”型口并將備好的栓線沿剪口插入，輕輕結(jié)扎，然后松ICA 動(dòng)脈夾，栓線調(diào)整角度順勢插入 ICA，遇阻力停止，深度約為 18 mm。將栓線與左側(cè) CCA 結(jié)扎固定，移去 CCA 動(dòng) 脈 夾，腦缺血模型制備成功。2 h后，將栓線從顱內(nèi)輕輕拔出，從球端退至 ECA止，剪掉多余的線并縫合皮膚，再灌注開始，記錄再灌注時(shí)間至 24 h 時(shí)止［7］。
1. 3 測定腦梗死體積再灌注 24 h 時(shí)，大鼠腹腔注射過量 10% 水合氯醛麻醉，迅速斷頭，取完整全腦， － 24 ℃ 冷凍30 min，從額極至枕極沿冠狀位切 2 mm 厚度切片6 片，除第 5 片用于 H2DCF-DA 染色計(jì)數(shù) ROS 細(xì)胞外，其余 5 片均浸泡于 2% TTC 染色液中，37 ℃溫箱中孵育 20 min，每隔 5 min 翻動(dòng)正反面，拍照，Imageplus5. 0 計(jì)算腦梗死體積。腦梗死體積百分比 = (A － B) /A × 100% ，A 為健側(cè)大腦半球體積= (A1 + A2 + …A6 )·h，B 為梗死側(cè)非梗死區(qū)大腦半球體積 = (B1 + B2 + …B6 )·h，A1 為第 1 片切片健側(cè)腦組織面積，B1 代表第 1 片梗死側(cè)非梗死區(qū)腦組織面積，h 表示切片厚度［8］。
1. 4 測定活性氧自由基(ROS)陽性細(xì)胞數(shù)目每個(gè)大鼠均取第 5 片腦切片用 H2DCF-DA 染色，按說明書操作，每張切片同等放大倍數(shù)拍照，借用 NIS Element 軟件，確定腦組織內(nèi)的 ROS 陽性細(xì)胞數(shù)和其分布密度。
1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法用 SPSS 20. 0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩組死亡率比較用 Fisher 精確概率法，計(jì)量資料用均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差( x ± s )表示，組間比較用單因素方差分析法，P＜ 0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

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