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噬菌體試驗的基本方法
閱讀:815 發(fā)布時間:2024-8-12(一)噬菌體的分離和純化
1 . 噬菌體的分離
每份未處理的污水樣品取100mL,混合后,經36±1℃培養(yǎng)14~24h,通過孔徑為0.45mm的薄膜濾器,檢查濾液中是否有噬菌體的存在。用斑點試驗法檢查噬菌體。
2 . 單斑純化
根據斑點試驗法的結果,估計濾液內噬菌體的數(shù)量。將濾液按百倍稀釋法作兩次連續(xù)稀釋。即吸取0.02mL,稀釋在2mL肉湯內,使成10-2;再吸取此稀釋液0.02mL,稀釋在2mL肉湯內,使成10-4。
(二)PFU和RTD
PFU和RTD是噬菌體效價的計量單位。PFU是噬斑形成單位,表示有感染能力的噬菌體數(shù)量,以每毫升內的PFU表示(PFU/ml)。RTD是常規(guī)試驗稀釋度,一般以平板上滴加噬菌體的部位剛剛能夠出現(xiàn)或剛剛不能出現(xiàn)完-全融合性裂解(CL)所需要的噬菌體稀釋度。
(三)噬菌體的制備
繁殖菌:制備噬菌體用的宿主菌稱為繁殖菌,噬菌體的繁殖菌應予以凍干保存。
噬菌體種: 制備用的噬菌體種應經三次純化后保存,種子管先作PFU測定。
(四)裂解譜和裂解模式
裂解譜是指一種噬菌體的作用范圍。裂解譜的測定是為了確定該噬菌體在種內或屬內的廣譜性,在種外或屬外的交叉反應性。
裂解模式是指幾種噬菌體組成為配套,各種細菌培養(yǎng)物被幾種噬菌體作用而出現(xiàn)的特殊的反應模式,不同的細菌,可呈現(xiàn)不同的反應模式。
裂解譜和裂解模式應使用達到規(guī)定效價的噬菌體進行測定。腸桿菌科診斷用噬菌體一般用原液進行試驗,效價要求在103~105RTD或109~1011PFU/ml之間。分型試驗一般用1 RTD的噬菌體。
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