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ELISA中常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法

1 選擇試劑 選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 2）手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)）； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。解決辦法： 1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2） 加樣后及時(shí)放入孵箱。 3） 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 4） 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5） 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。
3 孵育 可能原因： 1） 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 2） 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?，難以清洗*。解決辦法： 1） 貼封片或加蓋； 2） 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。
4 洗板 可能原因： 1） 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2） 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 3） 反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 解決辦法： 1） 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2） 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。
5 顯色 可能原因： 1） 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 2） 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1） 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2） 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 3） A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止 可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
7 讀板 如讀板時(shí)板底不清潔等。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。
所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。