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高糖對(duì)大鼠腹膜間皮細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響及苦參堿的干預(yù)作用

朱士彥１，甘 平２，廖 彧１，巫建芳１，龍貴華１

（１．廣東省佛山市順德區(qū)龍江醫(yī)院腎內(nèi)科 ５２８３１８；

２．貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腎內(nèi)科，貴陽(yáng) ５１００００）

［摘要］ 目的 研究高糖刺激下大鼠腹膜間皮細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子α（ＴＮＦ－α）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β１（ＴＧＦ－β１）及苦參堿的干預(yù)作用，探討腹膜纖維化發(fā)生機(jī)制。方法 通過(guò)體外培養(yǎng)大鼠腹膜間皮細(xì)胞（ＰＭＣｓ），依據(jù)加入藥物濃度分成５組：２．５％葡萄糖組（ｎ＝１５，Ａ 組）；低糖苦參堿組（２．５％葡萄糖，ｎ＝１５，Ｂ組）；４．２５％葡萄糖組（ｎ＝１５，Ｃ組）；高糖 苦 參 堿 組（４．２５％葡萄 糖，ｎ＝１５，Ｄ組）；對(duì)照組（ｎ＝１５，Ｅ 組，僅加不含血清的 ＤＭＥＭ－Ｆ１２ＢＭＳＣ 培養(yǎng) 基），分別 于 第 ２４、４８、７２小時(shí)收集培養(yǎng)上清液，采用ＥＬＩＳＡ 法測(cè)定各組培養(yǎng)上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 濃度 的 變 化，同時(shí)觀察各組大鼠腹膜間皮細(xì)胞光鏡下的表現(xiàn)。結(jié) 果 光 鏡下，可見(jiàn) Ｅ組和 Ｂ組腹膜間皮細(xì)胞小，呈卵圓形或圓形，生長(zhǎng)較為密集。Ａ、Ｃ、Ｄ組腹膜間皮細(xì)胞大、呈梭形或多邊形，分布較為稀疏；在 Ａ 組，培養(yǎng)上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平較 Ｅ組無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)變化（Ｐ＞０．０５）；而在Ｃ組，培養(yǎng)上清液中 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平較 Ｅ組增加明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。在 Ｂ組和 Ｄ組中，ＰＭＣｓ分泌 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１ 水平 Ｂ組較 Ａ 組減少，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＞０．０５）；Ｄ組較 Ｃ組明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。結(jié)論 苦參堿能拮抗高糖致大鼠腹膜間皮細(xì)胞分泌 ＴＮＦ－α和 ＴＧＦ－β１，從而保護(hù)腹膜間皮細(xì)胞。

［關(guān)鍵詞］ 葡萄糖；苦參堿；腫瘤壞死因子α；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β１；腹膜間皮細(xì)胞腹膜 透 析 （ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｄｉａｌｙｓｉｓ，ＰＤ）由于自身生物相容 性好，中分子物質(zhì)清除效率高等優(yōu)點(diǎn)，成為目前終末期腎臟疾病的shou選透析方式。但是反復(fù)發(fā)作腹膜炎癥可使有效腹膜透析面積減少，從而導(dǎo)致腹膜對(duì)溶質(zhì)的清除及水分的超濾功能減退甚至功能衰竭，是部分 ＰＤ患者改行血液透析治療的主要原因之一 ［１］。實(shí)驗(yàn)表明，腹膜長(zhǎng)期處于高滲微環(huán)境，可終破壞腹膜的整體結(jié)構(gòu)性，葡萄糖及其與機(jī)體產(chǎn)生的炎變產(chǎn)物是致 ＰＤ相關(guān)性腹膜超濾衰竭重要原因之一［２－３］。如何從病理生理學(xué)機(jī)制方面深入探究腹膜超濾衰竭的發(fā)病機(jī)理，成為近年來(lái)醫(yī)學(xué)研究的重要課題內(nèi)容。

現(xiàn)有研 究 證 實(shí) 人 腹 膜 間 皮 細(xì) 胞 （ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍｅｓｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＰＭＣｓ）具有多重重要的生理功能，如分泌、吸收、修復(fù)、支持等。在腹膜發(fā)生炎變時(shí)，ＰＭＣｓ自身分泌的炎性因子和細(xì)胞因子，又影響到腹膜 自 身 的 修 復(fù)［４－５］。本研 究 旨 在 探 討 高 糖 致大鼠 ＰＭＣｓ分泌腫 瘤 壞 死 因 子α（ＴＮＦ－α）和轉(zhuǎn) 化 生 長(zhǎng) 因 子β１（ＴＧＦ－β１）及苦參堿的抗纖維化作用，為臨床防治腹膜纖維化，延緩病人的生命，有著極其重要的現(xiàn)實(shí)意義。

１ 材料與方法

１．１ 材 料 選 取 健 康 ＢＡＬＢ／ｃ大 鼠 ３５ 只，雌 雄 兼 用，體 重１００～１２０ｇ，同等條件下 飼 養(yǎng)，鼠 齡６～８周，由貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

１．２ 主要試劑 胎牛血清（ＦＣＳ），ＤＭＥＭ－Ｆ１２ＢＭＳＣ培養(yǎng)基，胰蛋白酶液，卵母細(xì)胞裂解液，ＤＡＢ顯色劑（編號(hào) ＡＲ１０２２），抗體稀釋液（編號(hào) ＡＲ１０１６），Ｈａｎｋｓ平衡 鹽 溶 液，多 聚 賴(lài) 氨 酸，枸櫞酸鹽緩沖液，以上均購(gòu)自鄭州益康生物工程有限公司；ＴＮＦ－αＥＬＩＳＡ 試 劑 盒 （上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，編 號(hào)：ＡＲ２０５３）；ＴＧＦ－β１ ＥＬＩＳＡ 試劑 盒（上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，編號(hào)：ＡＲ２０９５）；即用型 ＳＡＢＣ 免疫組化染色試劑盒（上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司，編號(hào)：ＳＡ１０２０）；兔抗人細(xì)胞角蛋白１８抗體、抗人波形蛋白（上海聯(lián)碩生物科技有限公司）；兔抗 人 第Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體（上海聯(lián)碩生物科技有限公司）；２．５％、４．２５％腹膜透析液２Ｌ（廣州 百 特 公 司）；苦參 堿 注 射 液，每 支１５０ｍｇ（１０ ｍＬ），山西振東泰盛制藥有限公司，批 號(hào)Ｈ２００５９３３５。

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