人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）水平。用純化的人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入高遷移率族蛋白B1（HMGB-1），再與HRP 標記的高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。

人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA試劑盒資料：

規(guī)    格：（48T/96T） 

樣品類型：血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清等樣品類型 
檢測方法：酶聯(lián)免疫法
特 異 性  ：公司ELISA試劑盒具有較高的靈敏度和出色的特異性 
交叉反應：由于當前的酶聯(lián)免疫科學技術(shù)和知識有限，現(xiàn)有技術(shù)不可能完成藥物檢測的靶抗原之間和所有其他物種的類似物。因此，交叉反應可能仍然存在 
樣 本 量 ：50-100 μL 
實驗時間 ：1–4.5h 
儲存條件 ：2-8°C 
儲存方法 ：可以存儲在2 - 8°C長達1個月（專家建議：4°C恒溫保存，酶免試劑盒實驗效果更佳）。對于長期存儲,請在-20°C的存儲。盡量保持試驗板在密封鋁箔袋，避免潮濕 
有 效 期：  6 months 

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）水平。用純化的人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入高遷移率族蛋白B1（HMGB-1），再與HRP 標記的高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（320μg/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
“人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA試劑盒"的四大特性
1．特異性強：不與其它細胞因子反應。
2．重復性好：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
3．穩(wěn)定性高：實驗效果很穩(wěn)定。
4．超靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品，稀釋度和樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

“人高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA試劑盒"具體操作方法
以雙抗體夾心法為例展示：
1、雙抗體夾心法檢測抗原 
操作步驟如下： 
1）將特異性抗體與固相載體結(jié)合，形成固相抗體。洗滌除去尚未結(jié)
合的抗體及一些雜質(zhì)。 
2）加入待測標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。 
3）加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。 
4）加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色，測知標本中抗原的量。在臨床檢驗中，此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如 HBeAg、HBsAg、hCG 、AFP等。只要獲得針對受檢抗原的特異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標所使用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步檢測。
在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結(jié)合，而不再形成"夾心復合物"。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現(xiàn)象，此時反應后顯色的吸光值（位于抗原過剩帶上）與標準曲線（位于抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測讀，所得結(jié)果將低于實際的含量，這種現(xiàn)象被為鉤狀效應（hook effect），因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(zhì)（例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等）時，應注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

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