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干貨:細胞培養(yǎng)出現(xiàn)沉淀,什么原因?
閱讀:3916 發(fā)布時間:2019-6-19細胞培養(yǎng)是實驗中的重中之重,細胞沒有培養(yǎng)好實驗記性不了,細胞培養(yǎng)好了,為后面的實驗打下了雄厚的基礎(chǔ)!那細胞在培養(yǎng)中出現(xiàn)了沉淀,什么原因造成的呢?您知道嗎?好了,不賣關(guān)子了,恒遠邀您一起來看看!
細胞培養(yǎng)中的沉淀
如果排除了污染,細胞培養(yǎng)基中的渾濁通常被解釋為金屬、蛋白和其他培養(yǎng)基組分的沉淀。沉淀物可能損害細胞健康,因為他們通過螯合可移除養(yǎng)分和其他需要的組分,從而改變培養(yǎng)基的組成。沉淀物也是顯微鏡可見的,可能會干擾依賴成像的實驗分析。
產(chǎn)生沉淀的可能原因
一、溫度變化
在細胞培養(yǎng)中,溫度是引起沉淀的主要因素之一。當遭遇溫度的變化時,高分子量血漿蛋白會從溶液中析出;熱失活和凍融循環(huán)能促進蛋白降解和沉淀;因為液體或重組成培養(yǎng)基在使用之間保持冷藏儲存,鹽可能沉淀,尤其是10x或其他濃縮的儲存液。
二、失水誘導的濃度改變
如果培養(yǎng)基可能蒸發(fā),培養(yǎng)基組分(包括鹽) 的濃度將會增加,特別是培養(yǎng)基表面可能容易形成晶體沉淀。
三、鈣鹽
制備無血清培養(yǎng)基時,組分添加的順序可能導致不可溶分子的形成。鈣鹽尤其容易沉淀,比如CaCl2和MgSO4在溶液中反應產(chǎn)生CaSO4晶體。高壓滅菌和pH值不穩(wěn)定會加劇這一問題。
四、金屬補充物
銅、鐵和鋅等金屬離子是細胞生長所必需的,是無血清培養(yǎng)基的重要補充物。培養(yǎng)系統(tǒng)中其他血清組分的缺失可能導致這些金屬沉淀,為細胞形成有毒的環(huán)境。在較高pH環(huán)境下(一般>8時),碳酸鹽和氫氧根離子與銅離子、磷酸鹽和氫氧根離子與鐵離子、碳酸鹽、磷酸鹽和氫氧根離子與鋅離子、氫氧根離子與鎂離子易形成不溶性沉淀物;在氧化條件下,銅和鋅更易于沉淀。
五、污染
培養(yǎng)物渾濁可能是細菌或真菌污染造成的。
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