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技術(shù)文章

軟瓊脂法

閱讀:2562          發(fā)布時(shí)間:2012-9-10

軟瓊脂法

0.6% media-agar混合層底部。

使0.6%瓊脂混合下列組件這使得200毫升)

甲醚100毫升

如果20毫升

筆/ 2毫升ddh2o鏈球菌

28毫升

?溫暖組件37°

?添加12.4克瓊脂100毫升ddh2o和微波消融不要微波或您將失去太多卷)。微波只是足夠長的*融化的瓊脂

?加入50毫升瓊脂prewarmed混合物,你就準(zhǔn)備。

?渦流混合避免氣泡

?加入4毫升混合每6平方厘米

?允許*冷靜而你準(zhǔn)備你的細(xì)胞。

準(zhǔn)備上面層混合所有列出的成分瓊脂

您將需要一個(gè)50毫升錐形的每一個(gè)細(xì)胞系,你測試。準(zhǔn)備下列組合和地方()在37攝氏°pre。

組合

?2二甲醚12.5毫升

?中頻2.5毫升

?筆/鏈球菌0.25毫升

?ddh2o 3.5毫升

標(biāo)簽每個(gè)細(xì)胞系應(yīng)該有3 - 15毫升錐形管標(biāo)記105,104,或103這些都應(yīng)該細(xì)胞。

提升細(xì)胞系通過一個(gè)100μ細(xì)胞過濾器。

細(xì)胞計(jì)數(shù)。

懸浮細(xì)胞在1×105個(gè)/毫升5毫升)

設(shè)立稀釋如下

添加1毫升的珊瑚和1毫升的105個(gè)/毫升稀釋到105管。

加入9.5毫升和500μ玩家105個(gè)/毫升到104管和混合反相你不做這個(gè)-見下文)。

加入1.9毫升的珊瑚和100μ升104管1032.9毫升管從104這應(yīng)該留給你共7毫升)

現(xiàn)在融化2.4%瓊脂諾貝爾已準(zhǔn)備ddh2o你這一較早的時(shí)候到底層。

加入6.2毫升的諾貝爾一個(gè)50毫升錐形管和混合幾倍。

檢查以確保該管的內(nèi)容不夠酷你能碰到你的手腕,它應(yīng)該是舒適的溫暖。

現(xiàn)在你需要工作速度快,避免氣泡!!!!

添加以下瓊脂/媒體組合,每個(gè)管

添加2毫升的103和105管

添加7毫升到103管。

翻轉(zhuǎn)幾次。

板4毫升混合在每個(gè)相應(yīng)的

允許板坐30到60分鐘,直到他們是鞏固和再仔細(xì)地把他們轉(zhuǎn)移到孵化器

回到步驟4個(gè)細(xì)胞系。

長期實(shí)驗(yàn)你可以養(yǎng)活如果他們正在干或黃色與0.3%瓊脂混合

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