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技術(shù)文章

我司歐陽技術(shù)手把手教您繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

閱讀:1516          發(fā)布時間:2015-11-12

每個ELISA試驗都要做標(biāo)準(zhǔn)曲線,實驗新手剛接觸ELISA實驗的時基本上都是不知所措,尤其是實驗做完后需要分析數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖更是茫然。鑒于經(jīng)常有實驗新手客戶向我司技術(shù)部反映標(biāo)準(zhǔn)曲線圖繪制問題,歐陽技術(shù)根據(jù)自身多年的工作經(jīng)驗詳細(xì)整理了繪制標(biāo)曲的步驟流程,供廣大新老客戶參考。

1、擬和曲線:
輸入先進(jìn)行: 濃度值, 如0 10 50 100 400
輸入第二行:該濃度下的調(diào)整后的od值,如0 0.586 1.397 1.997 3.42
選擇這些輸入的數(shù)據(jù),用插入里的圖表按鈕,進(jìn)入圖表向?qū)?,在“?biāo)準(zhǔn)類型"中選擇“xy散點圖";在“子圖表類型"中選擇“折線散點圖",按“下一步";選擇“系列產(chǎn)生在行",按“下一步";數(shù)據(jù)標(biāo)志,可以填寫:如數(shù)據(jù)y軸,OD值;數(shù)據(jù)x軸,濃度;按下一步,點擊完成。可得曲線圖。
單擊曲線,按右鍵,選擇“添加趨勢線",在類型中,選擇多項式;在選項中,選擇顯示公式,選擇顯示R平方值。
得到公式和R平方值。
也可以用上面說的方法: 雙擊圖表,把它輸入到圖表的數(shù)據(jù)中,就可以擬和曲線。
2、計算濃度:
*次實驗:
標(biāo)準(zhǔn)曲線為:
y = -4E-05x2 + 0.026x
R2 = 0.9745
為例,已知OD值,計算濃度。
由于y = -4E-05x2 + 0.026x,所以可以得到:
4E-05x2 -0.026x +y=0
ax2 +bx +y=0
a=4E-05;b= -0.026; 
x=(-b-(b*b-4ay)(平方根)) /(2*a)
代入a,b,和y值,得
x=(0.026-(0.026*0.026-0.00016*y)(平方根))/(2*0.00004)
在excel里可以用以下公式表示:
x=(0.026-EXP(LN(0.026*0.026-0.00016*y)/2))/(2*0.00004)
通用公式為:
x=(-b-EXP(LN(b*b-4ay)/2))/(2*a)

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