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人γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒使用說(shuō)明書 
上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 
本試劑盒僅供研究使用。 
藥品名稱： 
通用名：人γ干擾素(IFN-γ)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒 使用目的： 
本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿、或其它相關(guān)組織液中γ干擾素(IFN-γ)含量。 實(shí)驗(yàn)原理 
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人γ干擾素(IFN-γ)水平。用純化的人γ干擾素(IFN-γ)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾素(IFN-γ)，再與HRP標(biāo)記的羊抗人受體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ干擾素(IFN-γ)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人γ干擾素(IFN-γ)含量。

 試劑盒組成

 1 20倍濃縮洗滌液 50ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶 2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（150μg/L） 0.5ml×1瓶 3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說(shuō)明書 1份 5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張   6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個(gè) 
標(biāo)本處理及要求  
1．血清、血漿、腦脊液、腹腔液標(biāo)本可直接測(cè)定； 
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。 
3．采集后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 
操作步驟 
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)
準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在*孔和第二孔中先各取50μl棄掉；再各取50μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為100μg/L，50μg/L ，25μg/L，12.5μg/L，6.25μg/L）。 
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。 

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用 

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。 
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

 7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。 

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 
 
計(jì)算 
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)），OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。  注意事項(xiàng) 
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔OD值的1.5倍），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物請(qǐng)避光保存。 
7．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。 
10. 如與英文說(shuō)明書有異，以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。 
 
檢測(cè)范圍：6.25 pg/ml-400 pg/ml 靈敏度：1.56 pg/ml 發(fā)表外文文獻(xiàn)二篇 
規(guī)格： 
96人份/盒 
保存條件及有效期 1．試劑盒保存：；2-8℃。