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技術解析腫瘤壞死因子的檢測方法
閱讀:1825 發(fā)布時間:2014-5-15 技術員根據(jù)腫瘤壞死因子的實驗,揭示了腫瘤壞死因子(tunlornecrosisfactor,TNF)有α和β兩種類型,后者亦稱淋巴毒素(lymphotoxin,LT),雖然產(chǎn)生的細胞類型不盡相同,但能與相同的受體結合,故二者的生物學活性極其相似;此外,二者又有膜結合型與分泌型兩種形式。
TNF-α與β在體內(nèi)、外均可對一些腫瘤細胞或細胞系起殺傷作用,而對體外培養(yǎng)的多種正常細胞則無細胞毒效應。根據(jù)這一特點,可利用對TNF敏感的靶細胞測定TNF活性。zui常用的方法是檢測TNF對小鼠成纖維細胞株L929或L-M細胞的細胞毒活性,細胞死亡率與TNF活性成正比。并可用特異性中和抗體來區(qū)別TNF-α與TNF-β。檢測細胞毒活性可用51Cr釋放法或染料染色方法。
利用抗原—抗體反應檢測TNF,可采用RIA、ELISA、間接免疫熒光法及免疫組化法。RIA及ELISA可用于待檢樣品的定量,現(xiàn)已有國產(chǎn)的TNF ELISA試劑盒出售,方法簡便、敏感且特異。而間接免疫熒光法及免疫組化法可用于對TNF的組織定位或觀察TNF在細胞內(nèi)及胞膜的定位。
TNF-α分為跨膜型及分泌型,前者分子量為26kD,而后者則為17kD??山柚鶶DS-PAGE電泳,將蛋白按分子量大小分開,再用免疫印跡技術特異性地顯示兩種類型的TNF-a。
根據(jù)技術員對腫瘤壞死因子的實驗分析,我們?yōu)槟峁┠[瘤壞死因子試劑盒,種屬多類,咨詢。或登錄在線留言。