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上海恒遠(yuǎn)生物公司所采用的酶免疫測(cè)定（enzyme immunoassay, EIA）或免疫酶技術(shù)（immunoenzymatic technique）是指用酶標(biāo)記抗體或酶標(biāo)記抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)與酶連接，然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測(cè)定。目前常用的方法稱(chēng)為酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA），其方法簡(jiǎn)單，方便訊速，特異性強(qiáng)。ELISA是由抗原（抗體）先結(jié)合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體（抗原）與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物（標(biāo)記物），此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性，當(dāng)偶聯(lián)物與固相載體上的抗原（抗體）反應(yīng)后，再加上酶的相應(yīng)底物，即起催化水解或氧化還原反應(yīng)而呈顏色。那么酶聯(lián)免疫吸附法中有哪些技術(shù)問(wèn)答，請(qǐng)點(diǎn)擊恒遠(yuǎn)查詢(xún)相關(guān)解析：（以下是根據(jù)客戶(hù)問(wèn)題整理精品解答）

問(wèn)：人的Quantikine ELISA試劑盒是否有相關(guān)的對(duì)照？

答：上海恒遠(yuǎn)R&D 為人的Quantikine ELISA試劑盒提供三重對(duì)照組。請(qǐng)同我們以便確定產(chǎn)品的目錄號(hào)。

問(wèn)：我想使用你們目錄中的重組蛋白作為我的ELISA的對(duì)照，但我發(fā)現(xiàn)質(zhì)量上有差異。這是為什么？

答：首先要考慮的是重組蛋白的質(zhì)量會(huì)高出試劑盒的可測(cè)試范圍數(shù)倍，必須將重組蛋白稀釋多次才能得到試劑盒的測(cè)試范圍。一般來(lái)說(shuō)是從mg/毫升稀釋到pg/毫升，在這中間光是移液管的誤差就達(dá)到了可測(cè)量的水平。

其次要考慮的是R&D Elisa試劑盒的免疫測(cè)試方法測(cè)量的蛋白水平是用一種抗體捕獲的、用第二種抗體測(cè)定的，這種測(cè)定是在試劑盒研發(fā)時(shí)與標(biāo)準(zhǔn)蛋白校正過(guò)的。這些經(jīng)過(guò)測(cè)定的早期標(biāo)準(zhǔn)蛋白成為基本校正物，后來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)都同它校正。這樣不同生產(chǎn)批號(hào)的免疫測(cè)定試劑盒將是一致的。這些基本校正物蛋白質(zhì)量的測(cè)量方法也許與你的試劑管中蛋白質(zhì)量的測(cè)定方法有所不同。

問(wèn)：什么是競(jìng)爭(zhēng)性ELISA?

答：競(jìng)爭(zhēng)ELISA基于競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合技術(shù)，即樣本中的待測(cè)分子與固定量的標(biāo)記的同樣分子（我們一般用堿性磷酸酶作為標(biāo)記）同時(shí)與固定在孔板上的抗體的同一結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)，參照標(biāo)準(zhǔn)曲線，試驗(yàn)數(shù)據(jù)值是定量的。

問(wèn)：什么是夾心ELISA？

答：夾層ELISA采用對(duì)樣本中分析物的特異的抗體作為固定化的捕獲抗體，然后用第二個(gè)帶標(biāo)記的抗體作檢測(cè)，檢測(cè)抗體對(duì)分析物也是專(zhuān)一的。當(dāng)參照標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)值是定量的。

問(wèn)：什么是直接ELISA？

答：直接ELISA是將被測(cè)的分析物直接包膜在微孔板表面，然后用測(cè)試抗體來(lái)證實(shí)被測(cè)分析物的存在。當(dāng)與重組蛋白（標(biāo)準(zhǔn)曲線）進(jìn)行參照時(shí)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)值是半定量的。

問(wèn)：恒遠(yuǎn)R&D 品牌的ELISA試劑盒可以做多少個(gè)樣本？

答：R&D品牌的ELISA試劑盒為48T，96T的規(guī)格，分別48T可做6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線及42個(gè)樣本，96T可做12個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線及84個(gè)樣本。

問(wèn)：Quantikine ELISA試劑盒里都包括什么？

答：R&D Systems的Quantikine ELISA試劑盒是一個(gè)完整的試劑盒。它包含了一個(gè)已包板的微孔板、酶標(biāo)抗體、標(biāo)準(zhǔn)蛋白、稀釋劑、底物、終止劑、洗液和微孔板密封膜。所有試劑盒對(duì)實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)中所列樣本都經(jīng)充分驗(yàn)證，確保高質(zhì)量。

問(wèn)：什么是DuoSet？

答：DuoSet ELISA開(kāi)發(fā)系統(tǒng)提供了足夠的捕獲抗體、測(cè)試抗體、標(biāo)準(zhǔn)蛋白和Streptavidin-HRP，可以做大約十五個(gè)96孔微孔板的實(shí)驗(yàn)。我們還提供了樣本試驗(yàn)流程和與這一系統(tǒng)配套的試劑。DuoSet ELISA開(kāi)發(fā)系統(tǒng)主要是為高通量篩選細(xì)胞培養(yǎng)的上清液所設(shè)計(jì)，但熟悉ELISA研發(fā)的實(shí)驗(yàn)人員已成功將其推廣到血清和血漿樣本的使用。

問(wèn)：我是否可將標(biāo)準(zhǔn)曲線的兩端延伸？

答：在任何情況下，我們都不支持超出確定范圍的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在我們確定的測(cè)試范圍，我們保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。

問(wèn)：為什么不將測(cè)試范圍延伸到所述的靈敏度？

答：靈敏度是統(tǒng)計(jì)中大于零的可測(cè)到的zui低值。它是通過(guò)本底信號(hào)和試驗(yàn)的可變性計(jì)算出來(lái)的。靈敏度是將20個(gè)零復(fù)制物的中值加兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差從標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成分析物的濃度。而zui低標(biāo)準(zhǔn)是我們可以放心的、仍可與標(biāo)準(zhǔn)曲線成直線相關(guān)的zui低點(diǎn)，因而是可定量的。