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BIM:ELISA試劑盒常見樣本的處理方法之組織樣本
閱讀:863 發(fā)布時間:2017-7-17ELISA(酶聯(lián)免疫吸附劑測定)是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法,樣本的處理對于ELISA實驗的成功有著舉足輕重的作用。 利用ELISA進(jìn)行檢測的樣本類型包括常見的血液(血清、血漿),組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液等,這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到ELISA實驗的結(jié)果。
下面就常見ELISA組織樣本處理方法的整理,希望對您有所幫助。
組織樣本一般是制成組織勻漿,處理方法如下:
1.取適量組織塊,于預(yù)冷PBS(0.02mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,稱重后備用(組織塊較大需先剪碎后再勻漿);
2.可同時選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果:首先將組織塊移入玻璃勻漿器,加入5-10ml預(yù)冷PBS(組織與PBS的質(zhì)量體積比建議為1:5即1g樣本加入5mlPBS)進(jìn)行充分研磨(有條件實驗室可選用機(jī)器勻漿),該過程需在冰上進(jìn)行;得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理(超聲破碎過程中注意冰浴降溫;反復(fù)凍融法可重復(fù)2次) 。
3.將制備好的勻漿液于5000×g離心5分鐘,留取上清即可檢測。
4.如果樣本需要長期保存,請?zhí)砑拥鞍酌敢种苿?。根?jù)實驗需要,組織勻漿樣本可先定量總蛋白,以便于統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)。某些組織樣本如肝臟,腎臟,腦組織會有假陽性反應(yīng)。
處理樣本的過程就是收集目標(biāo)蛋白的過程,由于蛋白容易變性,降解,故該過程應(yīng)盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要,尤其注意不要反復(fù)凍融,樣本處理之后可分裝密封保存,4度保存應(yīng)小于1周,-20度不應(yīng)超過1個月,-80度不應(yīng)超過2個月。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫,不應(yīng)加熱使之融解。樣本的處理是實驗成功的*步。以上就是關(guān)于常見樣本處理方法的一個簡述,供研究者參考。關(guān)于更多樣本處理方法,歡迎鎖定上海恒遠(yuǎn)生物公司!