詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:小鼠胰高血糖素樣肽1試劑盒
英文名稱:Mouse ghcagons-like pepfide 1,GLP-1 ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
保存條件:2-8℃
檢測(cè)方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
產(chǎn)品用途:For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù).
產(chǎn)品種屬齊全有:人,小鼠,大鼠,豚鼠,豬,犬,兔,牛,羊,猴,兔,馬等動(dòng)物種屬。
待檢樣本:體液,血清,血漿,細(xì)胞培養(yǎng)上清液,尿液,組織勻漿,心房水標(biāo)本等等。
“小鼠胰高血糖素樣肽1試劑盒"操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí),用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。加樣時(shí),槍頭應(yīng)直接對(duì)準(zhǔn)液面,切勿沿孔壁加樣。
1、加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
1.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
2.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,200μl/每孔,甩干。
3.每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液)100μl,37℃,60分鐘。
4.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,200μl/每孔,甩干。
5.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔顯色不明顯,即可終止)。
6.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
7.用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)備注:
1.用戶在初次使用試劑盒時(shí),應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。
2.每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及終止液。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
3.為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
4.未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,請(qǐng)于2-8℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記抗體工作液、或辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液。
5.建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
洗板方法:
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。
“產(chǎn)品名稱"計(jì)算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),OD值為縱坐標(biāo)(普通坐標(biāo)),在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng):
1.當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。
2.洗滌過(guò)程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。
3.一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。
5.如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)。
6.在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí),請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。
7.底物請(qǐng)避光保存。
8.不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
9.試劑盒保存:未開(kāi)封的試劑盒應(yīng)儲(chǔ)存于2-8℃;開(kāi)封后的酶標(biāo)板應(yīng)與干燥劑一起儲(chǔ)存于鋁箔袋中置于2-8℃保存。僅在此出儲(chǔ)存條件下,產(chǎn)品在有效期內(nèi)可正常使用。
70.濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
11.剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
elisa原理 elisa kit