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產(chǎn)品名稱：植物維生素B6 ELISA試劑盒

英文名稱：Plant Vitamin B6,VB6 ELISA KIT

Elisa實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備
　　1仔細(xì)閱讀說明書
　　2確定試劑盒在有效期內(nèi)
　　3按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）
　　4標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存
　　5準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等
　　6根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量
　　7按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑
　　DIY夾心法ELISA常見技術(shù)指南
　　8選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對；若選擇兩個(gè)單抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對。
　　9ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
　　10標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
　　11一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
　　12為了優(yōu)化靈敏度，建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。
　　13若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
　　14當(dāng)測定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig.

操作步驟
1．   使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2．   根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3．   加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
4．   甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5．   每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6．   甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7．   每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8．   取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9．   在450nm波長處測定各孔的OD值?！?/span>

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