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空心膠囊中金屬鉻檢測要點(diǎn)
在央視曝光膠囊藥物鉻超標(biāo)事件之后，中國食品藥品檢定研究院（中檢院）發(fā)布了《明膠藥用空心膠囊鉻檢測方法指導(dǎo)原則》,應(yīng)對明膠藥用空心膠囊殼中金屬鉻的應(yīng)急檢驗。方法中使用石墨爐原子吸收光譜法進(jìn)行測試，由于石墨爐測靈敏性很高，樣品稍微一點(diǎn)干擾都會導(dǎo)致結(jié)果錯誤。國家食藥監(jiān)局要求，藥用明膠、藥用膠囊、膠囊劑藥品和保健食品生產(chǎn)企業(yè)，應(yīng)當(dāng)健全企業(yè)質(zhì)量管理體系，從10月1日起，企業(yè)必須具備對所生產(chǎn)產(chǎn)品進(jìn)行全項檢驗的能力，不得再進(jìn)行委托檢驗。在此，我們就膠囊樣品前處理所使用的試劑及操作做相應(yīng)的探討。
樣品前處理是測試的關(guān)鍵步驟，既要保證消解*，又要保證消解過程樣品中的鉻不損失，且不能引入干擾。因此試驗中需使用優(yōu)級純硝酸消解。在測試過程中我們通常發(fā)現(xiàn)試劑空白溶液測定值過高，其原因主要來源于消解和定容的試劑。硝酸作為主要的消解試劑，一般需要加入5-10ml，消解完畢后再使用稀硝酸定容至10ml或50ml的容量瓶中，因此硝酸的質(zhì)量或者說硝酸中殘留的金屬離子（鉻）含量控制尤為關(guān)鍵。在指導(dǎo)原則中注明，方法中需使用優(yōu)級純試劑或選取背景較低的試劑進(jìn)行實驗，特別是消解用的硝酸，要求選用質(zhì)量穩(wěn)定的進(jìn)口優(yōu)級純試劑，以降低背景干擾。消解中使用的硝酸濃度為65%-69%，其中的金屬離子鉻含量需要嚴(yán)格控制。按照2010版《中國藥典》中對藥用膠囊的要求，其金屬鉻的含量要求控制在2ppm以內(nèi)。因此，消解使用的硝酸含量需要嚴(yán)格控制在20ppb以內(nèi)以防止干擾。如果待測的樣品鉻含量要求更高（如低于0.1ppm），或使用更高靈敏度儀器（ICP/MS）進(jìn)行檢測時，需要選擇需要選擇鉻含量更低的硝酸進(jìn)行消解（如小于1ppb的超純硝酸低或小于50ppt的超高純硝酸），見附表。
附表1 膠囊中金屬鉻檢測的Merck試劑包
在指導(dǎo)原則中還提到，如果測試膠囊殼（不透明膠囊）時，建議在微波消解時，樣品中除加硝酸外可另加0.5ml氫氟酸，以使膠囊中的二氧化鈦全部溶解。測試中使用的氫氟酸濃度一般為40%-48%，對氫氟酸中的金屬鉻含量要求也盡可能低（如10ppb）。
測試中使用的鉻標(biāo)一般由國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心提供，也可以選擇能提供證書并能從NIST溯源的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)生產(chǎn)機(jī)構(gòu)。鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為1000mg/L，用戶在臨用時再配置成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。有條件時也可以采用基準(zhǔn)試劑重鉻酸鉀自行配制。
試驗中所用容器及器皿均需在每次使用前用1：1的鹽酸溶液和硝酸溶液分別浸泡1h，用純化水沖洗干凈后再使用。微波消解容器應(yīng)采用儀器清洗程序清洗，不得采用鉻酸清洗液洗滌容器。為避免玻璃容器的干擾，試驗中宜采用塑料容量瓶（聚丙烯材質(zhì)）定容。同時，為了方便安全地移取硝酸和氫氟酸，建議分別使用有機(jī)型瓶口分配器和氫氟酸移取的瓶口分配器。另外實驗用水采用純化水，儲藏水的容器宜用聚丙烯塑料材料制成，不宜選用玻璃容器長期儲存。
《指導(dǎo)原則》方法簡述：
鉻標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備：取鉻單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.19779.0500），用2%硝酸稀釋制成每1ml含鉻1.0μg的鉻標(biāo)準(zhǔn)貯備液。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：分別精密量取鉻標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2%硝酸溶液稀釋制成每1ml含鉻0~80ng的對照品溶液。臨用時現(xiàn)配。
供試品溶液的制備：精密稱取空膠囊0.5g，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸（1.00456.2500）5~10ml，混勻，浸泡過夜，蓋上內(nèi)蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解。消解*后，取消解內(nèi)罐置電熱板上緩緩加熱至紅棕色蒸汽揮盡并近干，用2%硝酸轉(zhuǎn)移至50ml量瓶（4730261BR）中，并加2%硝酸稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；同法制備試劑空白溶液，作為空白校正。
測定：取供試品溶液與對照品溶液適量，以石墨爐為原子化器，照原子吸收分光光度法（《中國藥典》2010年版（二部）附錄IV D*法），在357.9nm的波長處測定，計算，即得。
附表1 膠囊中金屬鉻檢測的Merck試劑包
| 序號 | 名稱 | 描述 | 鉻* | 包裝 | 貨號 | 備注 |
| 1 | 優(yōu)級純硝酸 | 69%硝酸EMSURE® ACS | 0.020ppm | 1L | 1.01799.1000 | 優(yōu)級純 |
| 65%硝酸EMSURE® ISO | 0.020ppm | 2.5L | 1.00456.2500 | 優(yōu)級純 | ||
| 2 | 超純硝酸 | 硝酸 65% Suprapur® | 1ppb | 1L | 1.00441.1000 | 超純 |
| 硝酸60% Ultrapur® | 50ppt | 1L | 1.01518.1000 | 超高純 | ||
| 3 | 氫氟酸 | 氫氟酸 48% EMSURE® | 0.010ppm | 500ml | 1.00334.0500 | 優(yōu)級純 |
| 4 | 鉻標(biāo)液 | 鉻標(biāo)準(zhǔn)液,NIST溯源0.5 mol/l HNO3 溶解CertiPUR® | 1000 mg/l | 500ml | 1.19779.0500 | AAS標(biāo)液 |
| 鉻ICP標(biāo)準(zhǔn)溶液NIST溯源2-3%HNO3 CertiPUR® | 1,000 mg/l | 100ml | 1.70312.0100 | ICP標(biāo)液 | ||
| 5 | 重鉻酸鉀 | 重鉻酸鉀二級標(biāo)準(zhǔn)品CertiPUR® | 80g | 1.02403.0080 | 基準(zhǔn)物質(zhì) | |
| 6 | 磷酸二氫銨 | 磷酸二氫銨EMSURE® ACS | 500g | 1.01126.0500 | 優(yōu)級純 | |
| 7 | PFA容量瓶 | PFA容量瓶帶旋蓋，10ml | 36208BR | 痕量分析 | ||
| PFA容量瓶 | PFA容量瓶帶旋蓋，50ml | 36228BR | 痕量分析 | |||
| 8 | 瓶口分配器 | 有機(jī)型瓶口分液器，10ml | 4730341BR | 移取強(qiáng)酸 | ||
| 有機(jī)型瓶口分液器，50ml | 4730261BR | 移取強(qiáng)酸 | ||||
| 痕量分析型瓶口分液器，10ml | 4740041BR | 移取氫氟酸 | ||||
| 9 | 超純水 | Milli-Q Advantage超純水系統(tǒng) | Z00Q0V0T0 | 超純水系統(tǒng) |
在指導(dǎo)原則中還提到，如果測試膠囊殼（不透明膠囊）時，建議在微波消解時，樣品中除加硝酸外可另加0.5ml氫氟酸，以使膠囊中的二氧化鈦全部溶解。測試中使用的氫氟酸濃度一般為40%-48%，對氫氟酸中的金屬鉻含量要求也盡可能低（如10ppb）。
測試中使用的鉻標(biāo)一般由國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心提供，也可以選擇能提供證書并能從NIST溯源的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)生產(chǎn)機(jī)構(gòu)。鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度為1000mg/L，用戶在臨用時再配置成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。有條件時也可以采用基準(zhǔn)試劑重鉻酸鉀自行配制。
試驗中所用容器及器皿均需在每次使用前用1：1的鹽酸溶液和硝酸溶液分別浸泡1h，用純化水沖洗干凈后再使用。微波消解容器應(yīng)采用儀器清洗程序清洗，不得采用鉻酸清洗液洗滌容器。為避免玻璃容器的干擾，試驗中宜采用塑料容量瓶（聚丙烯材質(zhì)）定容。同時，為了方便安全地移取硝酸和氫氟酸，建議分別使用有機(jī)型瓶口分配器和氫氟酸移取的瓶口分配器。另外實驗用水采用純化水，儲藏水的容器宜用聚丙烯塑料材料制成，不宜選用玻璃容器長期儲存。
《指導(dǎo)原則》方法簡述：
鉻標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備：取鉻單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.19779.0500），用2%硝酸稀釋制成每1ml含鉻1.0μg的鉻標(biāo)準(zhǔn)貯備液。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：分別精密量取鉻標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2%硝酸溶液稀釋制成每1ml含鉻0~80ng的對照品溶液。臨用時現(xiàn)配。
供試品溶液的制備：精密稱取空膠囊0.5g，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸（1.00456.2500）5~10ml，混勻，浸泡過夜，蓋上內(nèi)蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解。消解*后，取消解內(nèi)罐置電熱板上緩緩加熱至紅棕色蒸汽揮盡并近干，用2%硝酸轉(zhuǎn)移至50ml量瓶（4730261BR）中，并加2%硝酸稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；同法制備試劑空白溶液，作為空白校正。
測定：取供試品溶液與對照品溶液適量，以石墨爐為原子化器，照原子吸收分光光度法（《中國藥典》2010年版（二部）附錄IV D*法），在357.9nm的波長處測定，計算，即得。