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上海研謹生物科技有限公司

大鼠心肌細胞(H9c2)細胞培養(yǎng)說明書

時間:2021-3-22閱讀:3784
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大鼠心肌細胞(H9c2)細胞培養(yǎng)說明書

 

細胞介紹

B. Kimes and B. Brandt從源于BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細胞株亞克隆了H9c2(2-1)細胞株,它表現(xiàn)許多骨骼肌的特性。這個細胞株中的成肌細胞能融合形成多核的肌管,并對乙酰膽堿的刺激發(fā)生反應。如果培養(yǎng)基中的血清濃度下降到1%,融合發(fā)生得很快。

 

細胞特性

1) 來源:心臟

2) 形態(tài)成肌細胞,貼壁生長

3) 含量:>1x106 /mL

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T25或者1mL凍存管包裝

 

細胞接受后的處理:

1) 收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。

2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),去掉封口膜并將T25置于37培養(yǎng)約2-3h。

3) 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

4) 如果細胞長滿(90%以上)請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。

5) 接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們取得聯(lián)系。

 

細胞用途:僅供科研使用。

                       

本公司細胞培養(yǎng)操作規(guī)程,供參考

一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準備:

1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H,GIBCO,貨號12800017,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%注:血清要求為北美或澳洲血清)。(DMEM液體培養(yǎng)基:GIBCO,11995-065。

2) 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)。液氮儲存。

二. 細胞處理

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2

2. 2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA培養(yǎng)瓶中,置于37培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加3ml此細胞的培養(yǎng)基終止消化。

3. 輕輕打后吸出,移入15ml離心管中,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 移入到事先準備好的含有5ml培養(yǎng)基T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)

3)細胞凍存:細胞生長狀態(tài)良好時,進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,先要消化處理并進行細胞計數(shù)。消化方法按照細胞傳代方法的1-3驟進行,后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數(shù)后離心,用血清重懸浮,DMSO終濃度為10%。加入DMSO迅速混勻,按每1ml數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106細胞凍存。

 

注意事項:

1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

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