產(chǎn)品名稱(chēng):大鼠胰島素自身抗體(IAA)ELISA試劑盒
英文名稱(chēng):Rat insulin autoantibodies,IAA ELISAKit
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
①直接法 該方法直接利用抗原 與酶聯(lián)抗體的結(jié)合,較簡(jiǎn)單易行。A.假抗原。在聚苯乙烯酶標(biāo)版的孔穴中加入待檢測(cè)的抗原(捕食者胃內(nèi)含物抽提液)0.2mL,在4℃冰箱中過(guò)夜,使抗原黏附于塑料孔壁上。B.洗滌兩次,倒置于干毛巾上,使孔穴中的液體盡量流出。c.加酶聯(lián)抗體。 各孔穴中加入酶聯(lián)抗體0.2mL,在mL37℃下孵育3h,使其充分結(jié)合。d. 加底物。 用PBS充分洗滌以除去未結(jié)合的酶聯(lián)抗體,然后加入底物(鄰苯二胺)0.2 mL,于37℃反應(yīng)30min,用2mol/L硫酸0.05 mL終止反應(yīng)。e. 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定其吸光度值,分別設(shè)陽(yáng)性、陰性和空白對(duì)照,以確定陽(yáng)性反應(yīng)臨界值。
②雙抗體夾心法 該方法與直接法的不同在于吸附抗體。a. 包被抗體。酶標(biāo)板的孔穴中加入0.2 mL抗體(用PH=9.6/0.05mol/L碳酸鹽緩沖液稀釋?zhuān)?,?7℃水浴中孵育3h,移入4℃冰箱過(guò)夜。將各孔中多余的抗體傾去,加入PBS洗滌,立即甩去,再將PBS加滿(mǎn)各板孔,置5min,甩去溶液,如此洗滌2次,倒置于干毛巾上,使孔穴中的液體盡量流出。b. 加待檢抗原。沒(méi)孔中加入待檢捕食者胃內(nèi)含物抽提液0.2 mL.同時(shí)設(shè)陽(yáng)性、陰性和空白(PBS)對(duì)照,37℃水溶中孵育3h,轉(zhuǎn)入冰箱中過(guò)夜。如上法洗滌3次。C. 加入酶聯(lián)抗體。每孔加入酶聯(lián)抗體0.2 mL,37℃水浴孵育2h,如上法洗滌3次。d. 加底物。 每孔加入底物鄰苯二胺0.2 mL, 37℃水浴孵育1h,加入2mol/L硫酸0.05,以終止反應(yīng)。e. 用 ELISA檢測(cè)儀測(cè)定其吸光度值。
③間接法 與前兩種方法不同點(diǎn)在于酶聯(lián)抗體與抗原的間接結(jié)合。a. 每孔加入待檢抗原0.2 mL ,4℃冰箱中過(guò)夜,使抗原黏附于塑料孔壁上。并依上法洗滌3次。b. 每孔加0.2 mL,用PBS稀釋的抗體,37℃孵育2-3h。c.用PBS洗滌3次后,加入溶于PBS的酶聯(lián)抗體0.2mL,37℃孵育2-3h。d. 加底物,方法同上。e. 用ELISA檢測(cè).
其他產(chǎn)品:Human Bence-Jones protein,BJP ELISAKit
Human Carcinoembryonic Ferritin,CEF ELISAKit
Human squamous cell carcinoma related antigen,SCCAg ELISAKit
Human tumor specific antigen,TSA ELISAKit
Human melanoma metastasis surface adhesion molecule,MMSAM ELISAKit
Human breast cancer susceptibility protein 2,BRCA-2 ELISAKit
Human apoptosis signal regulating kinase 1,ASK-1 ELISAKit
Human apoptosis signal regulating kinase 1,ASK-1 ELISAKit
Human Bcl-2 associated X protein, Bax ELISAKit
Human Transfer factor,TF ELISAKit
Human Colon Cancer Antigen,CCA ELISAKit
Human H-ras ELISAKit
Human c-sis ELISAKit
Human c-jun ELISAKit