中文名稱:人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒
英文簡稱:Human Lactoferrin,LTF/LF ELISAKit
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ELISA實(shí)驗(yàn)條件:加樣,包被物質(zhì)及其濃度
加樣:在ELISA中除包被外,一般需要進(jìn)行4-5次加樣.在定性測定中有時(shí)不強(qiáng)調(diào)加樣量的準(zhǔn)確性,例如規(guī)定為加樣一滴,此時(shí)應(yīng)該使用相同口徑的滴管,保持準(zhǔn)確的加液姿勢,使每滴液體的體積基本相同.在定量測定中加樣量力求準(zhǔn)確.標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)定配制.加樣時(shí)應(yīng)將液體加在孔底,避免加在孔壁上部,并注意不可出現(xiàn)氣泡.
包被物質(zhì)及其濃度:在ELISA中,將抗原或抗體固定在載體表面,稱為固想的包被或包埋,固想包被的質(zhì)量直接關(guān)系到酶免疫測定法的測定結(jié)果.理想的包被應(yīng)該是:固相表面應(yīng)該吸附盡可能多的特異抗體(或純抗原物質(zhì));吸附應(yīng)較牢固,能耐受數(shù)次洗滌;非特異性吸附作用要?。唧w操作中應(yīng)考慮下述因素:包被物質(zhì)及包被濃度,包被緩沖液的pH及離子強(qiáng)度,包被溫度,時(shí)間及洗滌等.
抗原或抗體吸附于固相,吸附能力有差異.固相包被的機(jī)制有三種:*種是物理性吸附,即抗原或抗體通過物理力被動地吸附于疏水性固相載體的表面,物理性吸附的過程較簡單,不發(fā)生化學(xué)反應(yīng),不需特殊條件,適用于多種類型和型式的載體,如聚苯乙烯試管及酶標(biāo)板凹孔,纖維素膜等,目前使用zui廣泛; 第二種是共價(jià)交聯(lián),先讓物理惰性物質(zhì)(固相)接上化學(xué)性質(zhì)活潑的基團(tuán),通過該基團(tuán)再把抗原或抗體與固相載體交聯(lián),引入的活性基團(tuán)?!槲於疄V紙亦可作為固相,先用溴化氰激活紙質(zhì)纖維素,再與抗體交聯(lián),用化學(xué)交聯(lián)法制得的固相,其吸收容量大,批號之間的差異小,而且價(jià)格低廉,用共價(jià)法交聯(lián)可能是固相包被標(biāo)準(zhǔn)化的*途徑; 第三種是交聯(lián)于蛋白質(zhì),應(yīng)用極少.
固相抗體與固相表面的吸附是通過物理作用.糖蛋白類物質(zhì)如癌胚抗原,血型物質(zhì),脂蛋白,細(xì)菌脂多糖,糖脂及變性DNA,均可吸附于聚苯乙烯塑料表面,而天然DNA,中性多糖用于包被塑料固相表面的效果不佳或背景著色深.有人認(rèn)為聚苯乙烯吸附抗原好,聚乙烯吸附抗體效果好.有一些預(yù)處理固相板的方法可以改善吸附,如廠家用射線照射,使用者用乙酸,鹽酸,戊二醛或多聚賴氨酸處理板.用戊二醛和鹽酸預(yù)處理板不僅促進(jìn)吸附,還能降低非特異性反應(yīng),用多聚賴氨酸可增強(qiáng)某些多糖抗原的吸附.更多介紹詳情請咨詢.
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