中文名稱:人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA試劑盒
英文簡稱:Human Lactoferrin,LTF/LF ELISAKit
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ELISA實驗條件:加樣,包被物質及其濃度
加樣:在ELISA中除包被外,一般需要進行4-5次加樣.在定性測定中有時不強調加樣量的準確性,例如規(guī)定為加樣一滴,此時應該使用相同口徑的滴管,保持準確的加液姿勢,使每滴液體的體積基本相同.在定量測定中加樣量力求準確.標本和結合物的稀釋液應按規(guī)定配制.加樣時應將液體加在孔底,避免加在孔壁上部,并注意不可出現(xiàn)氣泡.
包被物質及其濃度:在ELISA中,將抗原或抗體固定在載體表面,稱為固想的包被或包埋,固想包被的質量直接關系到酶免疫測定法的測定結果.理想的包被應該是:固相表面應該吸附盡可能多的特異抗體(或純抗原物質);吸附應較牢固,能耐受數(shù)次洗滌;非特異性吸附作用要?。唧w操作中應考慮下述因素:包被物質及包被濃度,包被緩沖液的pH及離子強度,包被溫度,時間及洗滌等.
抗原或抗體吸附于固相,吸附能力有差異.固相包被的機制有三種:*種是物理性吸附,即抗原或抗體通過物理力被動地吸附于疏水性固相載體的表面,物理性吸附的過程較簡單,不發(fā)生化學反應,不需特殊條件,適用于多種類型和型式的載體,如聚苯乙烯試管及酶標板凹孔,纖維素膜等,目前使用zui廣泛; 第二種是共價交聯(lián),先讓物理惰性物質(固相)接上化學性質活潑的基團,通過該基團再把抗原或抗體與固相載體交聯(lián),引入的活性基團?!槲於疄V紙亦可作為固相,先用溴化氰激活紙質纖維素,再與抗體交聯(lián),用化學交聯(lián)法制得的固相,其吸收容量大,批號之間的差異小,而且價格低廉,用共價法交聯(lián)可能是固相包被標準化的*途徑; 第三種是交聯(lián)于蛋白質,應用極少.
固相抗體與固相表面的吸附是通過物理作用.糖蛋白類物質如癌胚抗原,血型物質,脂蛋白,細菌脂多糖,糖脂及變性DNA,均可吸附于聚苯乙烯塑料表面,而天然DNA,中性多糖用于包被塑料固相表面的效果不佳或背景著色深.有人認為聚苯乙烯吸附抗原好,聚乙烯吸附抗體效果好.有一些預處理固相板的方法可以改善吸附,如廠家用射線照射,使用者用乙酸,鹽酸,戊二醛或多聚賴氨酸處理板.用戊二醛和鹽酸預處理板不僅促進吸附,還能降低非特異性反應,用多聚賴氨酸可增強某些多糖抗原的吸附.更多介紹詳情請咨詢.
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