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超微量分光光度計進行核酸定量的應用分析

閱讀:729        發(fā)布時間:2022-8-10
  核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率較高的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈DNA、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的高吸收峰的吸收波長260nm。
  
  由于每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應消光因子。如:1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。
  
  測試后的吸光值經過上述系數(shù)的換算,從而得出相應的樣品濃度。除了核酸濃度,分光光度計顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm。
  
  純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。
  
  A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
  
  超微量分光光度計可以像普通的紫外-可見分光光度計一樣行使功能。如BIO-DLMicroDrop可以顯示從185到910nm的光波下樣品的吸光值??梢酝瑫r指定檢測40個波長下的吸光值并把數(shù)據(jù)顯示在報告中。

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