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如何對超微量分光光度計進行有效測量
閱讀：1025 發(fā)布時間：2022-11-12
超微量分光光度計是精密光學(xué)儀器，出廠前經(jīng)過精細的裝配和調(diào)試，如果能對儀器進行恰當(dāng)?shù)木S護和保養(yǎng)，不僅能保證儀器的可靠性和穩(wěn)定性，也可以延長儀器使用壽命。
設(shè)備出現(xiàn)問題的幾率并不高，尤其是當(dāng)設(shè)備正常使用和日常維護時，更多的問題可能由外部因素導(dǎo)致，如樣品的均質(zhì)、顆粒物或氣泡干擾等。要定期對超微量分光光度計進行測量，這樣才能有效避免儀器發(fā)生故障問題。
標(biāo)準(zhǔn)品測量
常用的標(biāo)準(zhǔn)品可使用BSA或核酸標(biāo)準(zhǔn)品，可從各試劑廠家購買，或使用如BCA定量試劑盒，QUBIT核酸定量試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品。請注意標(biāo)準(zhǔn)品一定要在效期之內(nèi)，且保存得當(dāng)(通常低溫)。也可以使用設(shè)備廠家提供的小分子化合物標(biāo)準(zhǔn)品，如Implen提供的PHP標(biāo)準(zhǔn)品。標(biāo)準(zhǔn)品是有等級區(qū)分的，通常附帶有檢定證書的標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)稱濃度會更準(zhǔn)確。
特別指出的是，使用未知濃度的樣品，來評估不同設(shè)備的測量結(jié)果，并以其中一臺作為基準(zhǔn)，判定另外一臺的準(zhǔn)確性，是錯誤的。
重復(fù)性測量
在缺乏標(biāo)準(zhǔn)品，或標(biāo)準(zhǔn)品由于保存不當(dāng)狀態(tài)已存疑時，可使用未知濃度樣品做重復(fù)性測試。這可以判斷設(shè)備的穩(wěn)定性，以排除一些潛在問題，如樣品臺損壞、樣品的非均質(zhì)，成分干擾等。雖然不能確定準(zhǔn)確性誤差，但重復(fù)性很好的設(shè)備，很大幾率是沒有大問題的。當(dāng)然，這需要結(jié)合您的允差要求，綜合考量。
梯度稀釋測量
使用已知濃度或未知濃度的樣品，均可進行梯度稀釋測量，以驗證設(shè)備的線性穩(wěn)定性。使用設(shè)備的標(biāo)準(zhǔn)曲線功能可便捷地完成此項測試，并給出線性回歸。當(dāng)梯度稀釋的R2趨近于1，設(shè)備的線性可滿足廣泛的動態(tài)范圍內(nèi)的測量要求，同時也可反映設(shè)備的良好狀態(tài)。需要注意的是，梯度稀釋時一定要選擇定期校準(zhǔn)過的，準(zhǔn)確性好的移液器，且正確操作。
基線穩(wěn)定性測量
光源和CCD檢測器，作為設(shè)備的核心組件，其穩(wěn)定性對于設(shè)備而言是非常重要的，而基線測量可以很好地反映這些部件的狀態(tài)。使用水(或空氣)作為空白，并且用水(或空氣)作為樣品，做多次重復(fù)測量，如果吸光值的漂移很小，通?？煞从吃O(shè)備的光學(xué)系統(tǒng)組件狀態(tài)正常。
基線穩(wěn)定性測量
光源和CCD檢測器，作為設(shè)備的核心組件，其穩(wěn)定性對于設(shè)備而言是非常重要的，而基線測量可以很好地反映這些部件的狀態(tài)。使用水(或空氣)作為空白，并且用水(或空氣)作為樣品，做多次重復(fù)測量，如果吸光值的漂移很小，通?？煞从吃O(shè)備的光學(xué)系統(tǒng)組件狀態(tài)正常。