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人elisa試劑盒樣本操作及原理
閱讀：546 發(fā)布時(shí)間：2019-5-10人elisa試劑盒樣本操作及原理
人elisa試劑盒組織樣本的處理：
用預(yù)冷的PBS (0.01M,pH=7.4)沖洗組織，以去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣本對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。
關(guān)于人elisa試劑盒的固相載體原理：
一、良好的ELISA板應(yīng)該是吸附機(jī)能好，空缺值低。
二、為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣，可應(yīng)用如下的試驗(yàn)：用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和陰性標(biāo)本，將它們進(jìn)行一系列稀釋后，在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操縱步驟進(jìn)行測(cè)定，然后比較結(jié)果。可作ELISA中載體的材料良多，zui常用的是聚苯乙烯。在ELISA試劑盒中用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠，表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加。
三、與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。人ELISA試劑盒所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差，應(yīng)小于10%。其長(zhǎng)處是表面積極大，反應(yīng)在懸液中進(jìn)行，其速率與液相反應(yīng)近似。
在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大，這種載體就是這一ELISA測(cè)定項(xiàng)目的zui合適的固相載體。小珠的另一特點(diǎn)是更易于使洗滌*，使用特殊的洗滌器，使小珠在洗滌過(guò)程中動(dòng)彈淋洗，其洗滌效果遠(yuǎn)較板孔的浸泡式為好。ELISA試劑盒常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng/ml）包被ELISA板各孔，洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體，保溫后洗滌，加底物顯色，終止酶反應(yīng)后，分別測(cè)每孔溶液的吸光度。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體，反應(yīng)后用磁鐵的吸引進(jìn)行分離，洗滌利便，試劑盒一般均配以特殊儀器。
四、為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè)，有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的，放入座架后，大小與尺度ELISA板相同。聚苯乙烯ELISA板因?yàn)樵系牟煌椭谱鞴に嚨牟顒e，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大，因此，每一批號(hào)的ELISA板在使用前須事先檢查其機(jī)能。