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質(zhì)粒小量提取試劑盒介紹
閱讀：351 發(fā)布時(shí)間：2020-1-3質(zhì)粒小量提取試劑盒注意事項(xiàng)：
1、溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA(將試劑盒中提供的RNaseA 全部加入)，混勻，置于2-8℃保存。
2、第yi次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明在漂洗液中加入無(wú)水乙 醇配制成工作液(向15ml的漂洗液中加入60ml的無(wú)水乙醇 )。
3、使用前請(qǐng)先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁，如有混濁現(xiàn) 象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，待溶液恢復(fù)澄清后再使用。
4、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應(yīng)立即蓋緊蓋子，如非指明，所 有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī) 室溫下進(jìn)行離心。
5、如果是提取革蘭氏陽(yáng)性菌質(zhì)粒，必須在裂解細(xì)胞前破細(xì)胞 壁，方法如下：收集適量菌體，加入250ul溶液Ⅰ，充分懸浮 菌體，加入溶菌酶至終濃度為10-20mg/ml，37℃處理30min 左右。加入溶菌酶的濃度和處理時(shí)間可根據(jù)不同的菌株和具體 試驗(yàn)條件進(jìn)行調(diào)整。
6、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul，體積過(guò)小會(huì)影響回收效 率；洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液 應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范 圍)，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率。
本試劑盒采用堿裂解法裂解細(xì)胞，通過(guò)吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的DNA的特性提取質(zhì)粒DNA。吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能高效、專一地吸附DNA，可大限度去除雜質(zhì)蛋白質(zhì)及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。從1-5ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中，可快速提取5-15μg純凈地高拷貝質(zhì)粒DNA，提取率達(dá)85-90％。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒DNA可適用于各種常規(guī)的分子生物學(xué)試驗(yàn)，包括酶切、PCR、測(cè)序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn)。本試劑盒無(wú)需使用酚、氯f(wàn)ang等有毒試劑，操作安全。