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PCR檢測試劑盒原理：

 本試劑盒系由預(yù)包被PCR檢測試劑盒的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬瘟病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬瘟病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬瘟病毒抗體。

 

PCR檢測試劑盒注意事項(xiàng)：

1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出來的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無從談起。

2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。

3、采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。

4、檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。

5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個點(diǎn)，但至少要保證有5個點(diǎn)。

6、做出的PCR檢測試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動，但一般來說，相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98，對于有些實(shí)驗(yàn)，至少要0.99甚至是0.999.

PCR檢測試劑盒性能：

1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2. 靈敏度：檢測濃度小于0.1 U/mL。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6個月